孙凤娥 刘玉霞 许郑林 胡洁

    近年来，糖尿病和乳腺癌的关系受到广泛关注。大量研究显示，糖尿病患者发生乳腺癌的危险显著增加，糖尿病与乳腺癌的发生发展密切相关[1]。白介素-6(IL-6)是一种多效性细胞因子，对恶性肿瘤的发生发展及预后具有重要意义。目前有关葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞分泌IL-6的影响，尚未见相关研究报道。本实验体外检测不同浓度的葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞IL-6 mRNA表达的影响，为分析糖尿病与乳腺癌发生发展的关系提供实验和理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与材料 实验用肿瘤细胞株为小鼠乳腺癌细胞株(4T1肿瘤细胞，河北医科大学免疫学教研室冻存);IL-6、βactin引物(上海生工生物工程公司合成);Prime Script PT reagent Kit反转录反应试剂盒(宝生物工程有限公司);PCR扩增试剂TaKaRa TaqTM(宝生物工程大连有限公司)。

    1.2 4 T1 肿瘤细胞培养 4T1肿瘤细胞复苏后，以2×105/ml的浓度接种于RPMI 1640培养基(其中含10%的胎牛血清，100 U/m l的青霉素，100 μg/ml的链霉素)中，置于 37℃、5%CO2的培养箱培养，24～48 h换液1次，当细胞生长至90%以上时进行传代。

    1.3 实验分组 取对数生长期的4T1肿瘤细胞进行分组实验。根据培养液加入葡萄糖和胰岛素浓度的不同，将实验所用细胞分为15组:A组(对照组)只加RPMI1640培养液(不含葡萄糖和胰岛素);B组RPMI 1640培养液+5 mmol/L葡萄糖;C组RPMI1640培养液+10 mmol/L葡萄糖;D组RPMI 1640培养液+25 mmol/L葡萄糖;E组RPMI1640培养液+35 mmol/L葡萄糖;F组RPMI 1640培养液+5μU/ml胰岛素;G组RPMI 1640培养液 +25μU/ml胰岛素;H组 RPMI 1640培养液125μU/ml胰岛素;I组 RPMI 1640培养液 +250μU/m l胰岛素;J组RPMI 1640培养液+1.25μU/m l胰岛素;K组 RPMI 1640培养液+5 mmol/L葡萄糖+5μU/m l胰岛素;L组RPMI 1640培养液+5 mmol/L葡萄糖+125μU/ml胰岛素;M组RPMI1640培养液+25mmol/L葡萄糖+125μU/ml胰岛素;N组RPMI1640培养液+25 mmol/L葡萄糖+5μU/ml胰岛素;O组RPMI 1640培养液+25 mmol/L葡萄糖 +1.25μU/m l胰岛素 ......