孙凤娥 王蕾 周慧敏

    近年来，糖尿病患者恶性肿瘤发生率明显增加。大量研究显示，糖尿病与乳腺癌的发生发展密切相关[1]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在抑制肿瘤免疫、促进肿瘤血管形成中发挥重要作用，对恶性肿瘤的发生发展及预后具有重要意义[2]。目前有关葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞分泌VEGF的影响，笔者尚未见相关研究报道。本实验体外检测不同浓度的葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞VEGF分泌的影响，为分析糖尿病与乳腺癌发生、发展的关系提供实验和理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 实验用肿瘤细胞株为小鼠乳腺癌细胞株(4T1肿瘤细胞，河北医科大学免疫学教研室冻存);RPMI 1640细胞培养基为海克隆生物制品有限公司产品;胎牛血清为ExCell Biology，Inc.产品;胰岛素为江苏万邦生化医药股份有限公司产品;葡萄糖、青霉素、链霉素均为华北制药有限公司产品;小鼠VEGF酶联免疫试剂盒为美国R＆D公司产品。

    1.2 4T1肿瘤细胞的培养 4T1肿瘤细胞复苏后，接种于RPMI 1640培养基(其中含10%的胎牛血清，100 U/ml的青霉素，100 μg/ml的链霉素)中，置于 37℃、5%CO2的培养箱培养，约24～48 h换液1次，当细胞生长至90%以上时进行传代。

    1.3 实验分组 取对数生长期的4T1肿瘤细胞进行分组实验。根据培养液加入葡萄糖和胰岛素浓度的不同，将实验所用细胞分为15组:A组(对照组)只加RPMI 1640培养液(不含葡萄糖和胰岛素);B组RPMI 1640培养液+5mmol/L葡萄糖;C组RPMI 1640培养液+10 mmol/L葡萄糖;D组RPMI 1640培养液+25 mmol/L葡萄糖;E组RPMI 1640培养液+35 mmol/L葡萄糖;F组RPMI 1640培养液+5μU/ml胰岛素;G组RPMI 1640培养液 +25μU/ml胰岛素;H组 RPMI 1640培养液 +125 μU/ml胰岛素;I组 RPMI 1640 培养液 +250 μU/ml胰岛素;J组RPMI 1640培养液 +1.25 μU/ml胰岛素;K 组 RPMI 1640培养液+5 mmol/L葡萄糖+5 μU/ml胰岛素;L组RPMI 1640培养液+5 mmol/L葡萄糖+125 μU/ml胰岛素;M组RPMI 1640培养液+25 mmol/L葡萄糖+125 μU/ml胰岛素;N组RPMI 1640培养液+25 mmol/L葡萄糖+5 μU/ml胰岛素;O组RPMI 1640培养液 +25 mmol/L葡萄糖 +1.25 μU/ml胰岛素 ......