王军民 刘石萍 方澍名 姚希贤

    肝纤维化(LF)是所有慢性肝病进展成肝硬化的必经阶段，而肝纤维化发生的中心环节则是肝星状细胞(HSCs)的活化与增殖，因此抑制HSCs活化与增殖则成为阻止并逆转肝纤维化的主要途径之一。经大量临床与基础研究证实，中药有效方剂“益肝康”对肝纤维化有相当的治疗作用[1]。目前尚乏慢性乙型肝炎患者“益肝康”药物血清对HSCs细胞内Ca2+信号转导机制影响的研究。本实验采用激光共聚焦显微镜(LSCM)与第三代钙荧光探针Fluo-3/AM技术，观察经用慢性乙型肝炎患者制备的“益肝康”药物血清对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)介导的HSCs胞浆游离钙(Ca2+i)变化的影响。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 病例选择:河北医科大学第二医院消化内科门诊就诊及病房住院之慢性乙型肝炎患者。

    1.2 纳入标准 (1)符合5中华医学会传染病与寄生虫病学分会肝病学分会、病毒性肝炎防治方案6慢性乙型肝炎诊断标准;(2)年龄18～55岁，性别男性;(3)HBVDNA(+)的“小三阳”患者;(4)肝纤维化血清标志物肝纤四项(HA、LN、PⅢP、IV-7s)有阳性表现;(5)影像学检查脾脏脾门处厚度4～4.5 cm，门静脉主干及脾门静脉内径正常;(6)研究期间同意不服用免疫调节剂、退黄药物及其他中药。

    1.3 排除标准 (1)合并其他类型肝炎者;(2)严重心、肾疾患者;(3)胆红素>5ULN;(4)近期(6个月)应用免疫抑制或增强剂者;(5)肝硬化失代偿期患者。

    1.4 细胞株 肝星状细胞株CFSC由美国Greenwel教授建株并惠赠，其表型为活化的HSCs，从四氯化碳(CCl4)诱发的肝硬化大鼠中分离并通过培养使细胞自发获得永生性[4]，冷冻保存于液氮中。

    1.5 液体配制

    1.5.1 正常含钙细胞培养液/台氏液:NaCl 130 mmol/L，KCl 2.7 mmol/L，CaCl21.5 mmol/L，MgCl22 mmol/L ......