李华 王丽 秦星 苏彦君 郝存勋

    有研究认为，阿片和其他成瘾药物具有共同的细胞和解剖通路，而受体后细胞、突触和神经网络的适应性改变是成瘾性形成的关键[1]。阿片类药物与其受体结合后，通过升高细胞内cAMP[2-4]和游离 Ca2+浓度 (intracellular free Ca2+concentra-tion，[Ca2+]i)[5，6]，分别激活 cAMP 依赖的蛋白激酶 A(cAMP-dependent protein kinase A，PKA)[2-4]及钙调蛋白依赖蛋白激酶(calmodulin-dependent kinase，CaMK)[7-9]，使转录因子 cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein，CREB)的Ser-133磷酸化，而持续调节其下游基因表达，参与神经元与突触的可塑性与适应性[2-4，7-10]。本研究在体外观察CRE-decoy ODN可选择性下调慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞的CREB的DNA的结合活性、nNOS及fosB基因表达上调的基础上，进一步在体观察CRE-decoy ODN对吗啡依赖大鼠戒断症状的影响，为探寻阿片类物质依赖的干预措施提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 仪器:可调定量移液器(2～1 000 μl)购自法国Gilson公司;微量注射器购自上海医用器材厂;S2-93自动双重纯水蒸馏器购自上海强申生化仪器厂;江湾I-C型脑立体定位仪购自第二军医大学生理学教研室。

    1.1.2 试剂及用品:盐酸吗啡购自沈阳第一制药厂;盐酸纳络酮购自美国Sigma公司;多聚甲醛、Na2HPO4、NaH2PO4购自北京化学试剂厂;全硫代磷酸化CRE-decoy ODN(5’-TGACGTCA TGACGTCA TGACGTCA-3’)由上海Sangon公司合成。

    1.1.3 实验动物:雄性Wistar大鼠(清洁级)40只，体重200～240 g，购自河北医科大学实验动物部。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组:40只Wistar大鼠在动物实验室适应饲养3 d后，随机分为5组，即0.9%氯化钠溶液对照组，侧脑室0.9%氯化钠溶液注射对照组，吗啡依赖组，吗啡戒断组，吗啡戒断CRE-decoy ODN治疗组，每组8只。分笼饲养，每笼5只。实验室通风良好，饲养温度(24±1)℃，相对湿度50%，黑/白照明周期为12/12 h。大鼠自由饮水、进食，保持垫料干燥。饲料中蛋白含量为20% ......