胡成栋 刘曦 张伯勋 周玉军 陈怀志 李东风 王飞

    同种异体肌腱较自体肌腱来源广泛，是目前肌腱替代品的主要来源。常用的冻干肌腱制作保存较方便，但细胞外结构破坏明显，而低温冷冻肌腱操作较为复杂、费时，冷冻过程中形成大量冰晶，致使所保存的肌腱活性较低，同时两者均存在一定程度的免疫排斥反应，而肌腱脱细胞处理在明显降低免疫原性的同时，较好的保留了肌腱的细胞外结构，本文探索同种异体肌腱脱细胞处理的可行性。

    1 材料与方法

    1.1 设计 以来亨鸡屈趾深肌腱为研究对象，首先应用正交设计法筛选适于进行肌腱脱细胞保存的化学方法，并应用图像分析系统予以判定，随后将脱细胞肌腱进行生物力学测定，并采用单盲法与正常肌腱进行随机对照的验证性研究。所有实验人员均接受过培训。

    1.2 材料 3～4个月龄来亨鸡18只，雌雄不拘，体重2.0 kg左右(由解放军总医院实验动物中心提供，普通级)，随机分为2组:以脱细胞处理的鸡屈趾深肌腱为实验组，以新鲜鸡屈趾深肌腱为对照组，每组9只。

    1.3 方法

    1.3.1 切取标本:来亨鸡俯卧位固定，双下肢外展，常规消毒铺巾，以1%利多卡因进行局部趾神经阻滞，取双侧第1趾掌侧正中切口，长约6 cm，切开皮肤及皮下组织，显露屈趾肌腱鞘，游离并切取屈趾深肌腱，将脱细胞组肌腱置入D-Hank’s液，于-10℃冷冻24 h后备用，新鲜组肌腱于实验前切取应用。

    1.3.2 脱细胞肌腱的制备:主要以Courtman等[1]提出的方法为基础完成。①将冻存的左侧第1趾屈肌腱取出，37℃水浴复温，反复冻融3次。②将复温的鸡屈肌腱然后将肌腱置于37℃、5%CO2的环境下，经过0.25%胰蛋白酶 +0.01%EDTA作用12 h。③将胰蛋白酶消化后的肌腱应用D-Hank’s液反复漂洗后，放入1%Triton-X100(D-Hank’s为溶剂)溶液中，在25℃、5%CO2的环境下，水浴振荡(150 r/min)的条件下作用120 h。④再将屈肌腱以无菌蒸馏水持续冲洗48 h。完成了脱细胞肌腱的制备。

    1.3.3 脱细胞肌腱形态学观察:分别将新鲜肌腱与脱细胞肌腱，以10%甲醛固定 ......