苑晓烨 李绍冰 李芳 杨圣俊 曾强

    动脉钙化在组织病理学上分为动脉内膜和动脉中层钙化。无论哪种钙化，都会引起血流动力学和机械力学的改变，最终将导致左心室肥大、心肌缺血和心律失常，并增加卒中和猝死的危险。血管钙化与骨代谢及血管平滑肌细胞(vascular smooth mucle cell，VSMC)表型转换关系密切。环三磷酸鸟苷依赖的蛋白激酶I(cGMP-dependent protein kinase，PKGI)及钙调神经磷酸酶(calcineurin，CaN)在参与调节血管平滑肌细胞增殖及骨代谢中发挥重要作用。既往研究发现培养VSMC内NO/PKG信号通路和/CaN信号存在交互调节作用[1]。但是，在血管钙化中NO-cGMP-PKG I通路与钙-CaN信号通路之间是否存在交互调节作用，进而影响血管钙化进程并不完全清楚。本研究旨在探讨大鼠血管钙化过程中NO-cGMP-PKG I通路与钙-CaN通路之间是否存在交互调节作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料 华法令、维生素D3购自Sigma公司;环孢霉素A(CsA，Sandimmum)购自Novartis公司;维生素K1为无锡市第七制药有限公司生产;SD雄性大鼠购自河北医科大学实验动物中心，PKGI α-mRNA原位杂交检测试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司合成，CaNA α mRNA原位杂交检测试剂盒由天津灏洋生物制品科技有限责任公司合成。

    1.2 动物分组及钙化血管的制备 参照文献[2]将实验动物随机分为对照组、钙化组、钙化+CsA组(CsA组)，每组12只。实验第1 ～8 天，3 组均给予维生素 K115 mg·kg-1·d-1，皮下注射，同时C组另给予CsA 10 mg·kg-1·d-1腹腔注射，A组和B组分别给予等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射;实验第3天开始，B、C 组另给予维生素 D33 ×105U·kg-1·d-1，皮下注射，持续至实验第5天，及华法令15 mg/100 g，12 h 1次，皮下注射，持续至第8天，对照组在相同时间给予等量0.9%氯化钠溶液皮下注射;实验第9天，所有动物以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后处死。

    1.3 标本采集 大鼠处死前12 h禁食不限水，以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，将大鼠置于冰盒上，开胸，暴露出心脏，分离胸主动脉，并向下剖开腹部，分离出腹主动脉，从主动脉根部至腹主动脉分叉处剪下主动脉，迅速置于4℃预冷的0.9%氯化钠溶液中冲洗，直至盐水清凉，置于有0.1%二乙基焦碳酸酯(DEPC)的多聚甲醛溶液中 ......