王海宾 国文 杨淑岭 康书慧 刘海云 曹金凤 田红卫 檀新云 刘玉肖

    结核病是严重危害人类健康的重要传染病之一。早在一百多年前Robert Koch就发现结核分枝杆菌是结核病的致病菌。由于缺乏完善的诊断技术，结核仍然是威胁人类健康传染病中的“头号杀手”[1]。事实上，在感染人群中，90% ～95%的感染者处于休眠状态，仅有5%～10%最终进展为临床结核病[2]。目前国外已有不少研究探讨IFN-γ基因多态性与某些传染病(如结核病、乙型肝炎、利什曼原虫等)间的关联[3-5]，但对于该多态性位点与中国汉族人群结核发生间的关联研究并不多见。因此，我们采用扩增难控制突变系统PCR(ARMSPCR)方法分析273例肺结核患者、297例对照明人群IFN-γ +874位点基因多态性与肺结核发病间的关联，并探讨可能的基因-环境交互作用。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    1.1.1 病例组入选与排除标准:选择2008年3月至2009年3月石家庄市第五医院结核科选择肺结核新发病例，所有病例均按以下国家统一标准确诊，即痰菌阳性同时胸X线片有肺结核特征病灶;或痰菌阴性，但胸部X线片示活动性肺结核征象、结核菌纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD)试验强阳性并具有明显结核病临床体征者。

    1.1.2 对照组入选与排除标准:选择同医院中无结核病史、诊断为其他疾病的患者，或病例的健康同事、亲友，对所有对照经X线胸透，排除近期结核感染者，同时排除其他部位结核、肺炎、肺癌、尘肺等结核相似病症，HIV感染、慢性疾病、肿瘤患者、长期使用激素或器官移植等免疫功能低下者。

    1.2 问卷内容 设计统一的调查问卷，由调查组成员对所有研究对象进行面对面的问卷调查，内容包括基本特征(如年龄、性别、籍贯、婚姻状况、文化程度、居住地、经济收入等)、生活行为方式(吸烟、饮酒、肉类摄入、居住环境、健身活动等)。既往病史、家族史、结核相关因素接触史、卡介苗接种史(以研究对象上臂的卡痕来判断，由专业临床医生检查卡痕并记录)。利用问卷培训流调人员，对研究对象进行预调查后进行相关的修订和改进。

    1.3 基因多态性检测

    1.3.1 基因组DNA提取:每个研究对象抽取3 ml血液，EDTA抗凝，全血基因组快速提取试剂盒(天根公司)提取全血中基因组DNA。

    1.3.2 基因多态性分析

    1.3.2.1 引物设计与合成参:参照文献[6]设计扩增 IFN-γ 基因第一内含子+874位点的PCR引物 ......