洪雷 崔雅静 姜达 李琰 郭炜 王娜 张健慧

    人类胸苷酸合成酶(thymidylate synthase，TS)是由两个相同亚单位组成的二聚体蛋白，其基因定位于第18号染色体上(18p11.32)[1]。TS是DNA生物合成的关键酶，它催化单磷酸去氧尿苷(dUMP)甲基化，使之转变为一磷酸脱氧胸苷(dTMP)。TS活性的抑制将直接影响DNA的合成和细胞的分裂增值，因此TS是以叶酸为基础的TS抑制剂化疗中的一个理想靶点[2]。另外，胸苷酸合成反应与蛋氨酸、叶酸代谢反应偶联，对DNA的甲基化和DNA的合成与修复有重要影响[3]。而个体的DNA甲基化水平以及DNA修复能力与肿瘤的发生发展有明显的相关性。许多研究表明TS的表达强度与肿瘤的恶性生物学行为密切相关[2]。TS高表达者的增殖抗原表达、血管侵犯、远隔转移率明显高于TS表达低者，因此TS高表达很可能对预测肿瘤的发生、发展甚至远处迁徙具有重要作用。本文通过采用PCR-RFLP技术，检测研究对象的TS多态性基因型，探讨TS基因多态性与非小细胞肺癌发生及其淋巴结转移的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选择病理诊断明确的非小细胞肺癌(NSCLC)患者177例作为NSCLC组。同时选择同一医院同一时期体检人员381例作为对照组。2组患者均来自河北省南部非高发区并均为汉族。手术患者的淋巴结转移信息来自手术记录。

    1.2 标本采集及DNA的提取 采集静脉血5ml，经枸橼酸钠抗凝，置4℃保存，并于采血后1周内，以蛋白酶K消化—饱和氯化钠盐析法提取外周血单核细胞DNA。

    1.3 TS 5’UTR和3’UTR多态性位点基因分型 TS 5’UTR多态重复序列基因型检测采用聚合酶链反应(PCR)分析方法进行。PCR反应体积为25 μl，其中模板DNA100 ng，10×PCR缓冲液 2.5 μl，1.5 mmolmgCl2，1 U Taq-DNA 聚合酶，dNTPs 200 μmol，TS 5’UTR 上游引物 (5’-GTGGCTCCTGCGTTTCCCCC-3’)和下游引物(5’-GGCTCCGAGCCGGCCACAGGCATGGCGCGG-3’)[4]各 200 nmol。PCR 反应条件为:94℃ 预变性5min，然后94℃ 30 s，63℃ 30 s，72℃ 30 s，35 个循环后72℃延伸10min。反应产物进行3%的琼脂糖凝胶电泳分析。预期2R、3R等位基因扩增产物分别为243 bp和215 bp。使用HaeIⅡ酶切对3R等位基因G→C SNP进行分型 ......