殷玉红 田小燕 宋海燕 纪英 杨颖博 王桂东 李艳稳

    在糖尿病肾病中，蛋白尿是其目前公认的早期临床表现，并且是促进糖尿病肾病进展的重要因素之一。紧密连接蛋白的异常表达与滤过膜的通透性改变的发生、发展密切相关。ZO-1表达于多种上皮细胞，是维持黏膜通透性的重要组成部分。实验证明ZO-1参与了缺血缺氧诱导的血脑屏障通透性增加[1]，并且在肠黏膜通透性增加中也发挥重要作用[2]。在糖尿病肾病模型中发现，ZO-1在糖尿病肾病发生、发展过程中其表达逐步减少，与尿蛋白呈负相关[3]。肾炎四味片具有减少尿蛋白、保护肾功能的作用，在糖尿病肾病中的治疗作用已得到广泛认可，但其作用机制目前尚未完全明了。本实验应用肾炎四味片干预糖尿病大鼠，探讨其是否通过调节ZO-1的表达来减轻糖尿病大鼠尿蛋白的排泄及其可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 雄性Sprague-Dawley大鼠36只，体重180～220 g，8周龄，由河北医科大学动物中心提供。随机分成3组:正常组，糖尿病组和肾炎四味片组，每组12只。所有动物均自由摄取饮食及饮水，喂标准大鼠食物。

    1.1.1 糖尿病动物模型建立:腹腔一次性注射链脲佐菌素(2%STZ)溶液，72 h后，采取尾静脉血测定血糖值。以血糖≥16.7 mmol/L作为大鼠糖尿病成模标准。大鼠自由进标准饮食，实验期间不给予任何降糖药物。

    1.1.2 药物干预:肾炎四味片对患者的剂量为3 g，3次/d。依据定量药理学中有关不同种属动物间的剂量换算方法推算大鼠的用药剂量为10mg·kg-1·d-1，每天给予糖尿病组大鼠灌胃1次。其余2组均灌胃等量自来水。于成模8、12周处死各组大鼠6只。

    1.2 标本采集

    1.2.1 尿液标本:实验8、12周末，3组随机各取6只大鼠，收集并记录大鼠24 h总尿量，留取5ml，测尿白蛋白排泄率。

    1.2.2 血液标本:糖尿病大鼠模型建立72 h后，取大鼠尾尖血，做血糖测定。在实验8、12周末，从每组随机取出的6只大鼠，乙醚吸入麻醉，称体重，断头取血，做血肌酐测定。

    1.2.3 肾组织的处理:取肾组织，体积小于2cm×2cm×0.4cm，用多聚甲醛液固定，做免疫组织化学检查;剩余的肾脏组织置于-80℃液氮速冻后保存，做PCR。

    1.3 观察指标及检测方法

    1.3.1 血尿生化指标测定:血肌酐、尿肌酐测定均用Ci-8200全自动生化仪 ......