高峰 杨季红 刘渤 刘玉英 马芳

    肝癌是世界范围内高发肿瘤，因其侵袭转移性强而成为临床治疗的难点，因此寻找肝癌治疗中的靶分子指标显得尤为重要。近年NDRG1基因表达与肿瘤生物学特性的关系备受关注，有研究发现NDRG1在肝细胞癌、结肠癌[1，2]等多种人类肿瘤中高表达，据此认为NDRG1作为癌基因参与并促进了肿瘤发生发展过程。但也有相反观点认为NDRG1是一种与细胞分化程度呈正相关的抑癌基因[3]。乙酰肝素酶(Hpa)是一种在多种恶性肿瘤中高表达且与肿瘤侵袭转移有极高相关性的葡萄糖醛酸内切酶[4]。关于NDRG1和Hpa异常表达与肝癌侵袭转移关系的研究文献未见报道，本研究应用免疫组织化学方法联合检测NDRG1和Hpa在肝癌中的表达，探讨二者在肝癌侵袭、转移中的作用。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 本研究中46例经病理证实的肝癌组织和12例肝血管瘤等正常肝组织取自本院2007年7月至2011年6月手术切除标本，所有患者术前均未经过放、化疗及免疫治疗。46例肝癌患者中，男30例，女16例;年龄28～69岁，平均年龄46岁;按照Edmonson病理学分级，Ⅰ、Ⅱ级26例，Ⅲ、Ⅳ级20例。癌旁组织均取自距肿瘤边缘1～2 cm的非肝癌组织。正常肝组织为同期手术治疗的肝脏良性疾病，其中肝血管瘤4例，肝囊肿3例，肝外伤5例。标本经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋保存。

    1.2 主要试剂 羊抗人NDRG1(N-19)多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，兔抗人Hpa多克隆抗体为美国LAB VISION公司产品，PV-9003、PV-9001超敏即用型二步法(非生物素)检测试剂盒为美国GBI公司产品，浓缩型二氨基联苯胺(DAB)试剂盒等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1.3 免疫组织化学染色 将石蜡组织块以4 μm厚度连续切片，分别做HE和免疫组织化学染色，常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化;3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶15 min。NDRG1抗原修复采用柠檬酸抗原修复液(0.01 mol/L，pH=6.0)、高压热修复。Hpa行磷酸盐缓冲液(PBS)微波修复抗原。分别滴加羊抗人NDRG1(N-19)多克隆抗体(1∶100)，兔抗人Hpa多克隆抗体(1∶50)，4℃过夜。滴加二步法检测试剂(按照说明书操作) ......