李宏 李伟 王星冀 张金艳 郭秀娟 李丽 魏媛媛

    研究表明，从细菌黏附定居、生长扩散到宿主的生理失衡，均与不同种类的细胞因子有关[1]。本文对两种菌落形态的鲍曼不动杆菌的活菌菌悬液、培养上清液及菌体裂解液诱导人肺腺癌细胞表达白介素-8(IL-8)的能力进行研究。目的在于初步探讨鲍曼不动杆菌引起肺癌细胞感染的机制，该菌是否能直接诱导人肺腺癌细胞表达IL-8从而引发炎性反应，以及两种表型的鲍曼不动杆菌刺激细胞表达IL-8的能力是否有差别。

    1 材料与方法

    1.1 菌株与细胞来源 鲍曼不动杆菌本室分离保存，A549细胞购自协和医科大学基础医学院细胞中心。

    1.2 主要试剂 PRMI-1640，Gibco公司。胎牛血清，杭州四季青生物制品研究所。哥伦比亚琼脂，法国生物梅里埃公司。Trizol，Invitrogen公司。RT试剂盒，Fermenters公司。PCR试剂盒，Promege公司。琼脂糖，REGULAR公司。DNA marker，Fermenters公司。

    1.3 仪器 低温离心机20B型，日本HITACHISCR。7300 PCR扩增仪，美国ABI。DF-CⅡ型水平电泳槽，北京东方。凝胶成像仪，美国FOTODYNE公司。

    1.4 主要方法

    1.4.1 活菌悬液制备:收集平板上过夜的细菌，将其悬于无双抗无血清的RPMI-1640中并混匀，制备2×109cfu/ml的菌悬液，并依次稀释10倍、100倍，使其终浓度为2×108cfu/ml、2×107cfu/ml。

    1.4.2 菌体裂解液制备:分别将3个浓度的活菌悬液20 ml在冰浴下超声(频率为5 000 Hz)30 min，过滤除菌。

    1.4.3 耗尽上清液的制备:250 ml的LB培养基中加入2×109cfu/ml的菌悬液2 ml ......