王荣琦 李建梅 南月敏 米红梅 赵素贤 孔令波 任伟光

    非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)是非酒精性脂肪性肝病病程进展的中心环节，是单纯性脂肪肝发展为肝硬化的必经之路[1]，有效阻止其发生及进展是该病治疗的关键。壳聚糖是甲壳素脱乙酰基后的产物，具有降血脂、提高免疫力、防癌、防治糖尿病、促进伤口愈合等多种生物功能[2]，但其在NASH中的作用及机制尚不清楚。本研究以蛋氨酸-胆碱缺乏(methionine and choline deficient，MCD)饮食建立小鼠NASH模型，采用壳聚糖中药复方进行干预实验，观察其对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-6(interleukin-6，IL-6)表达的影响，为NASH治疗策略的选择提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 MCD及蛋氨酸-胆碱充足饲料均购于美国ICN生物医学化学药品公司;壳脂胶囊(成分为甲壳、制何首乌、茵陈、丹参、牛漆)由内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司提供，国药准字：Z20050665。TNF-α、IL-6 ELISA试剂盒购于北京华美生物工程公司。总RNA提取试剂盒、RNA酶抑制剂、AMV反转录酶、TaqDNA聚合酶购于Promega公司。引物序列依据Gen-Bank设计，由上海生物工程公司合成。

    1.2 模型建立及标本采集 清洁级7～8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠18只，体重18～20 g，购于白求恩国际和平医院动物室，随机分为3组，每组 6只。对照组以 DL-蛋氨酸(3 g/kg)和氯化胆碱(2 g/kg)充足的饲料喂养;模型组以胆碱、蛋氨酸缺乏的高脂饲料(MCD)喂养;干预组在MCD饮食基础上加用壳聚糖中药复方溶液0.7 g/kg灌胃，每日1次(壳脂胶囊常温阴凉密闭保存，临用前根据小鼠体重取所需量，将胶囊成分溶于蒸馏水2 ml中制成壳聚糖中药复方溶液)。4周末在深度麻醉下处死各组小鼠，留取血清和肝组织。部分肝组织用10%甲醛固定，备做石蜡切片;余肝组织用液氮快速冷冻，-80℃保存，备提取RNA。

    1.3 血清学检测指标及方法 用日本Olympus AU 2700全自动生化分析仪酶法测定血清ALT、TC和TG水平;采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测定血清TNF-α、IL-6浓度，严格按照说明书操作。

    1.4 肝组织病理学观察 甲醛固定肝组织标本 ......