巴雅尔 张生彬 佟豪

    原发性肝细胞癌(HCC)是人体常见的恶性肿瘤之一，我国HCC发病率很高，其病死率居消化道肿瘤前列，其中肝癌浸润、肝内及门静脉转移是其预后不良及患者死亡的主要原因。近年来，随着分子生物学技术的不断进步，对HCC发病机制的研究也逐步深入。肝癌的生成涉及许多基因的变化，基因变化的积累引起控制细胞生长和分化机制的紊乱，各种基因参与细胞增殖、凋亡和DNA复制等过程，其表达的失控最终导致HCC的发生和发展。本研究应用免疫组织化学方法检测肝癌组织、肝硬化、正常肝组织中P53、P63的表达，探讨P53、P63与原发性肝癌临床病理特征的关系以及两者之间的相互关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料 2005年9月至2010年9月我院普外科肝癌患者手术切除的标本46例，另选肿瘤旁肝硬化组织包埋蜡块20例和肝良性病切除肝组织12例作为对照组，4 μm厚度切片待测。其中肝癌患者52例，男37例，女15例;年龄21～72岁。所有病例均经术后病理证实。P53一抗鼠人单克隆抗体，P63一抗鼠抗人单克隆抗体，浓缩型，工作浓度1∶50，EliVisionTM plus试剂盒，SP法即用型免疫组织化学二抗试剂盒，DAB显色剂(DAB-0031)等均购自福建迈新生物技术有限公司。

    1.2 方法 应用免疫组化法检测:全部标本取材后均常规用甲醛固定、石蜡包埋，制成4 μm连续切片后，进行免疫组EliVisionTM plus法染色，主要步骤:切片脱蜡至水，高压修复1.5 min，阻断内源性过氧化物酶20 rain，正常非免疫血清封闭30 rain，滴加1抗在室温孵育1 h，滴加50 μl聚合物增强剂A，室温孵育20 rain;滴加50 μl酶标抗鼠/兔聚合物B，室温孵育30 min;新鲜DAB显色，苏木素复染。以已知阳性反应片作阳性对照，阴性对照采用PBS替代一抗进行同步染色。

    1.3 判定标准 显微镜下随机选取4个高倍视野共记录200个肝癌细胞，(1)按显色组织所占的面积比例评分:(无阳性细胞或≤5%为0分 ......