郝辉 李娟 李亚辉

    近年来随着分子生物学的发展，使我们能够从蛋白水平、分子水平深入认识食管癌的发生、发展和预后。存活素(Survivin)是近年研究较多的凋亡抑制蛋白，在大多数人类肿瘤中其表达增多，与肿瘤细胞的凋亡、增殖、血管生成及其预后和耐药性的产生密切相关[1-3]。半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)则是涉及细胞凋亡的最关键的蛋白酶[4]，在Caspase级联反应中，直接介导下游的凋亡效应。故本研究通过检测56例食管癌组织中Survivin和Caspase-3蛋白的表达，分析其表达的相关性、与食管癌临床分期及预后的关系，拟为临床治疗提供有益的理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选择河北医科大学第四医院2010年1月至2011年1月放疗前病理证实为食管鳞癌的内窥镜活检标本56例，全部患者均接受根治性放射治疗，放疗前后无其他辅助治疗，放疗采用6MV-X线直线加速器，肿瘤总剂量54～68 Gy，中位剂量60 Gy，2 Gy/次，1 次/d，5 d/周。其中男34 例，女22 例;年龄50～74岁，中位年龄65岁;胸上段10例，胸中段38例，胸下段 8例;病变长度≤5.0 cm 14 例，5.1 ～7.0 cm 20 例，7.1 ～10.0 cm 18例，>10.0 cm 4例。依据2002年UICC食管癌国际 TNM 分期标准:全组患者 T1、T2、T3、T4 期分别为 2、38、14、2例;N0、N1期分别为38、18例;临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为2、30、18、6 例。

    1.2 检测方法 采用免疫组化SP法，1∶50浓度稀释的鼠抗人Survivin单克隆抗体，1∶75浓度稀释的鼠抗人Caspase-3单克隆抗体及IgG二抗工作液、SP试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。染色步骤参照试剂说明书完成。标本经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，5 μm连续切片，HE染色。

    1.3 判断标准 光镜下观察阅片，双盲法计数阳性细胞，5个高倍视野(×200)计数取均值。Survivin阳性表达为胞浆或胞膜呈棕黄色颗粒，按Cai-De参考标准[5]:每个视野中均无着色细胞者或阳性细胞数<25%者为阴性(-)，阳性细胞数≥25%者为阳性(+)(图1)。Caspase-3阳性表达为胞浆内出现棕黄色颗粒散在或弥漫片状分布，按Iseki标准[6]，根据 Caspase-3染色强弱及阳性细胞数两个方面综合判断Caspase-3标记指数:a染色强度(0=无 ......