尚素霜 程佳 张静 任月环 张利玲 于华 霍艳

    卵巢癌是病死率最高的妇科恶性肿瘤，目前其发病机制仍不清楚。由于卵巢的解剖位置隐蔽，卵巢癌具有发现晚、转移早等特点。所以如何控制卵巢癌的血管生成和转移就成为治疗卵巢癌、提高患者生存率的关键。目前晚期卵巢癌患者施行理想的肿瘤细胞减灭术较为困难，因此化疗对于卵巢癌治疗的成败具有决定性作用。但因为获得性耐药约占70%～80%，肿瘤细胞对化疗药物(尤其是铂类)产生耐药性是导致卵巢癌综合治疗失败的关键因素。目前对卵巢癌耐药机制研究的焦点已逐渐集中到细胞内的信号转导通路，本实验应用免疫组化技术检测58例卵巢上皮癌中人类表皮生长因子受体2(HER-2)、拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱα)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)组织中的表达、相互关系及临床意义，为卵巢癌有效治疗提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 标本 选择2008年10月至2009年12月我院住院患者手术标本存档的88份蜡块，其中正常卵巢组织10份(对照组)，卵巢良性上皮肿瘤组织20份(良性组)，卵巢上皮癌组织58份(卵巢癌组)。对照组患者年龄30～58岁，中位年龄44岁;良性组患者年龄18～50岁，中位年龄37岁;卵巢癌组患者年龄35～73岁，中位年龄56岁。3组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌组病理分级:高、中分化33例，低分化25例;手术病理分期按国际妇产科联盟(FIGO，1988年)的标准:Ⅰ、Ⅱ期22例，Ⅲ、Ⅳ期36例;浆液性42例，黏液性16例。所有患者均为初发，术前均未接受过放、化疗。

    1.2 主要实验试剂 鼠抗人HER-2单克隆抗体(工作浓度1∶50)，鼠抗人TOPO-Ⅱα单克隆抗体(工作浓度1∶50)，均购自Santa Cruz公司。兔抗人PI3K单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供。过氧化物酶标记的链霉卵白素标记盒(SP)试剂盒、DAB显色剂等均购自北京中衫金桥生物技术有限公司。

    1.3 免疫组化染色方法及结果判定 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法对HER-2、TOPO-Ⅱα和PI3K的表达进行检测。每批染色均设阴性和阳性对照。阴性对照采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗，阳性对照取已知HER-2、TOPO-Ⅱα和PI3K表达阳性的乳腺癌组织的石蜡切片。本实验染色判断标准:(1)根据阳性细胞的比例计分:光学显微镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞比例计算方法为阳性细胞数占总细胞数的百分比，取其平均值。①1分:阳性细胞比例≤10%;②2分:阳性细胞比例为10% ～50%;③3分:阳性细胞比例为50% ～75%;④4分:阳性细胞比例≥75% ......