邹国红 孙军祥 苏正 董丽儒 宋旭东

    ·论著·

    siRNA干扰Gal-3对Eca-109食管癌细胞株CyclinD1、p21、p27蛋白表达及细胞增殖的影响

    邹国红 孙军祥 苏正 董丽儒 宋旭东

    目的探讨siRNA干扰Galectin-3 mRNA后，食管癌Eca-109细胞株增殖活性的影响及Galectin-3、CyclinD1、p21、p27蛋白的表达。方法将Galectin-3-siRNA转染食管癌Eca-109细胞株后，分别用Real-time PCR、MTT、流式细胞术和免疫细胞化学分别检测转染效率、细胞增殖活性、细胞周期分布及Galectin-3、CyclinD1、p21、p27蛋白的表达。结果食管癌Eca-109细胞增殖活性明显减少，主要分布在G1期，Galectin-3和CyclinD1蛋白表达下降，p21和p27蛋白的表达升高。结论运用siRNA可有效抑制Galectin-3蛋白的表达及细胞增殖活性，Galectin-3参与食管癌Eca-109细胞株的增殖与CyclinD1、p21、p27蛋白关系密切，Galectin-3可成为治疗食管癌的靶基因。

    Galectin-3;CyclinD1;p21;p27;Real-time PCR、siRNA;食管癌

    Galectin-3是Galectin(半乳凝素)家族的重要成员之一，广泛表达于正常上皮细胞和免疫细胞，参与多种生物学过程，包括细胞增殖、分化、粘附、凋亡及新生血管形成。研究显示，Galectin-3与肾癌、甲状腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌和乳腺癌等多种肿瘤的生长、浸润和转移密切相关[1]。本研究采用RNAi技术，将针对人Galectin-3基因的siRNA转染入Eca-109食管癌细胞系，观察Eca-109食管癌细胞系增殖情况及CyclinD1、p21、p27蛋白的表达，探讨Galectin-3在食管癌发生、发展中的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 Eca-109食管癌细胞株购自中国医学科学院细胞库。Lipofectamine2000转染试剂购自 Invitrogen公司，MTT及RPMI-1640培养基购自Sigma公司，PBS、胰酶及胎牛血清购于中科院血研所，Galectin-3、CyclinD1、p21、p27鼠抗人单克隆抗体及免疫细胞化学相关试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。RT-PCR Master Mix及PCR引物购自上海生物工程有限公司。Galectin-3引物序列:上游5-CTGGGCCACTGATTGTGCCTTAT-3 ......