杨蓉娟 许艳蕾 刘雪琴 魏丽莉

    ·论著·

    端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌细胞株的影响

    杨蓉娟 许艳蕾 刘雪琴 魏丽莉

    目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对癌细子宫内膜癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与子宫内膜细胞株共同温育一定时间后，观察细胞形态变化，检测细胞Bcl-2蛋白表达情况，测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导子宫内膜癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为出现细胞质浓缩，变圆，核染色不均匀，核物质边聚成新月形或块壮;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示，反义寡核苷酸在细胞进入DNA合成期前引起DNA损伤，使细胞停滞在G0～G1期，并诱导细胞凋亡。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性，诱导子宫内膜癌细胞凋亡，从而抑制子宫内膜癌的增殖。

    端粒酶;子宫内膜癌细胞;反义寡聚脱氧核苷酸;凋亡

    近年来子宫内膜癌发病率占全世界常见恶性肿瘤的第七位，为女性生殖道恶性肿瘤之一。随着生活方式的改变，发病率在世界范围内呈上升趋势，有研究表明，95%的子宫内膜癌组织的端粒酶阳性[1]，端粒酶子宫内膜癌中高表达，而在大多数正常组织中几乎不表达，使其成为治疗肺癌的重要靶点之一。笔者前期的研究证实，端粒酶反义寡核苷酸能够抑制子宫内膜癌细胞生长[2]，本文进一步探讨其机制。

    1 材料与方法

    1.1 HTERT反义寡核苷酸的设计合成 从基因库中查出hTERT反义寡核苷酸的碱基序列，设计出互补于起始密码子区的反义片段，选择起始密码子上游6个碱基及后续的14个碱基，共 20个碱基长度为作用的靶序列的反义寡核苷酸(ASODN)另外合成一段hTERT基因的正义寡核苷酸(SODN)作为对照，每一条链均进行全硫代修饰。由北京赛百盛基因技术有限公司合成，寡核苷酸贮藏于-20℃冰箱中备用，使用时用双蒸水溶解稀释成所需浓度。

    1.2 子宫内膜癌细胞株 购于北京医科大学一医院实验室。采用含10%新生牛血清(56℃灭活30 min灭活)、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素的RPMI-1640培养基，在37℃、5%CO2、95%饱和湿度条件下培养于二氧化碳培养箱，0.25%胰酶消化，每周传代培养2～3次。

    1.3 细胞培养与转染 子宫内膜癌细胞株 于10%新生牛血清(56℃灭活30 min灭活)、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素的RPMI-1640培养基中，在37℃、5%CO2饱和湿度的恒温培养箱中培养。细胞贴壁生长 ......