张桂东 宋春丽 周少英 武来兴 尹清臣

    近些年来胆管癌的发病率逐渐升高，虽然医学影像学和临床其他检测方法的有所提高，但是由于胆道系统的解剖和生理学特点，早期诊断和早期治疗均较困难，导致许多患者就诊时已是晚期，失去了手术机会，且胆管癌的恶性程度较高、预后差，给普通外科医生提出了严峻的挑战。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助因子，在DNA复制、细胞增殖及细胞周期调控中发挥重要作用。但是有关PCNA在胆管癌中的研究甚少。本实验应用免疫组化法，RT-PCR方法来检测PCNA在胆管癌组织中的表达，探讨它们与胆管癌临床病理因素之间的关系。旨在为判断胆管癌的恶性程度和生物学行为提供客观指标。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 42例原发性胆管癌、17例相同个体癌旁胆管组织及20例正常胆管组织来自邯郸市中心医院2005年12月至2010年12月手术切除标本。所有胆管癌患者术前未经任何治疗。所有标本为术中立刻获取的新鲜胆管癌组织、相同个体癌旁(距瘤缘0.5 cm)胆管组织及正常胆管组织，保存于液氮中，用于RT-PCR实验。术后胆管癌标本立刻固定在10%中性甲醛溶液，包埋在石蜡里，用于免疫组化研究。为避免误差，由两位有经验病理医师进行病理组织学诊断。42例胆管癌患者中男23例，女19例;年龄40～76岁，平均年龄60岁;高和中分化胆管癌27例，低分化胆管癌15例;肝门部25例，中下段17例;其中有14例发生了淋巴转移。

    1.2 主要试剂 鼠抗人PCNA单克隆抗体(北京中杉公司);FITC标记的山羊抗兔IgG(Jackson Immunoresearch Laboratiries Inclot58630);Trizol试剂(美国 Gibco BRL公司);RT试剂盒(美国Promega公司);PCR酶混合物(赛百盛生物工程公司);dNTP(赛百盛生物工程公司);GAPDH引物(上海生工生物工程公司);PCNA引物(上海生工生物工程公司);100 bp DNA marker(赛百盛生物工程公司) ......