杨文静 邓婧 曲红梅

    随着抗生素的大量应用，口腔厌氧菌的耐药性呈增加趋势[1]。因此天然物质将作为治疗口腔疾病的新方法，目前有超过25%的处方及非处方药来源于植物[2]。中草药也将为抗厌氧菌药物的研制提供广阔的前景。丹参作为祖国传统药物被广泛应用于临床。丹参的有效成分为水溶性(如:丹参素)及脂溶性(丹参酮ⅡA等[3])两大部分。不同的提取方法获得的丹参主要成分不同[4]。丹参对金黄色葡萄球菌和其他耐药菌株有较强的抑菌作用[5，6]，但对厌氧菌的抑菌性研究较少。实验应用丹参不同的提取液对口腔厌氧菌进行抑菌实验，研究其抑菌性，为其在口腔领域中的应用提供一定的科学理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 (1)药物:丹参生药，由青岛大学医学院附属医院药厂提供;(2)菌株:牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)ATCC 33277，变形链球菌(Streptococcus mutans，S)，伴放线放线杆菌 (A.actinomycetemcomitans，A.a)ATCC 24523，乳酸杆菌(Lactobacillus，LB)均由首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所提供;(3)培养基MSA平板培养基，CDC平板培养基，由首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所自配。

    1.2 方法

    1.2.1 丹参液的制备

    1.2.1.1 丹参水煎液:200 g丹参生药经水煎两次，合并滤液。留出一半液体(70 ml)，蒸发至25 ml(4000 mg生药/ml)。按倍比稀释原则，用蒸馏水将丹参水煎液制成8个浓度的制剂(最大浓度为4000 mg/ml)，高压消毒，4℃保存备用。

    1.2.1.2 50%醇沉丹参液:剩余70 ml，进行50%的乙醇醇沉，(即加入70 ml 100%乙醇静置12 h后，取上清液80 ml，再加入80 ml 50%乙醇静置2 h，取上清液，并在真空负压下，温度50℃，应用旋转蒸发仪回流乙醇，)得到25 ml丹参液(4000 mg生药/ml)。稀释及消毒同上。

    1.2.1.3 95%醇取丹参的提取:500 g丹参用95%乙醇3 L浸泡12 h后过滤，再加入95%乙醇3 L浸泡1.5 h过滤，并在真空负压下，温度50℃，应用旋转蒸发仪回流乙醇，得到250 ml丹参液(2000 mg生药/ml)。使其自然蒸发至膏状。用95%乙醇将95%醇取丹参浸膏溶解，配成4000 mg生药/ml的液体;按倍比稀释原则，用95%乙醇稀释成8个浓度的制剂;用过滤器(0.22 μm)过滤消毒 ......