张云虹 王小玲

    淋巴道转移是癌症的主要死亡原因之一，它是预后不良的重要危险因素，也是确定治疗方案和手术方式的重要指标。乳腺癌是我国女性常见的恶性肿瘤之一，淋巴管是乳腺癌细胞转移到腋窝淋巴结的主要途径。淋巴管和血管伴行生长，但在结构和功能方面却有着明显不同，以前对肿瘤淋巴管的研究由于缺乏特异性的淋巴管内皮标记物而远滞后于对肿瘤血管的研究。新近发现的抗M2A的单克隆抗体D2-40能高度特异性的标记淋巴管内皮细胞[1，2]。本文通过免疫组化法研究D2-40标记的乳腺癌淋巴管的病理学特征，定量分析D2-40阳性微淋巴管密度，探讨其在乳腺癌淋巴结的转移中的临床意义及其与其他病理参数之间的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集衡水市第二人民医院2008年5月至2011年8月乳腺癌患者术后组织石蜡标本50例，另选取同期乳腺纤维腺瘤标本30例作为对照组。患者均为女性，年龄28～78岁，中位年龄45岁。50例中，其中浸润性导管癌41例，浸润性小叶癌6例，导管内癌2例，黏液腺癌1例。有淋巴结转移的30例，无淋巴结转移的20例。肿瘤直径0.6～8 cm，平均2.6 cm。病理分级：Ⅱ级7例，Ⅱ～Ⅲ级22例，Ⅲ级12例。临床分期：Ⅰ期的8例，ⅡA期的22例，ⅡB期的17例，ⅢA期的3例。所有病例术前均未接受放化疗，均有完整的临床病理资料。

    1.2 试剂及免疫组化方法 主要试剂鼠抗人D2-40免疫组化单克隆抗体，金·多聚赖氨酸粘附玻片，UltrasensitiveTMSP超敏试剂盒(鼠/兔)，DAB显色试剂盒，PBS磷酸盐缓冲液(粉剂);柠檬酸盐抗原修复液(粉剂)均由福州迈新生物技术开发有限公司提供。免疫组化方法：石蜡切片4μm厚，放入烤箱烤蜡3 h;常规二甲苯、梯度酒精脱蜡至水;柠檬酸盐抗原修复液高温修复;切片依次滴加过氧化物酶阻断试剂，正常非免疫动物血清，第一抗体D2-40，生物素标记的第二抗体，链霉素抗生物素蛋白—过氧化物酶试剂;切片上滴加新鲜配制的DAB显色试剂显色;自来水冲洗终止显色，苏木素复染，中性树胶封固。

    1.3 免疫组化结果判断 D2-40特异性的定位于淋巴管的内皮细胞 ......