王方娜 李亚丽 楚伟 何金波

    衰老是一个复杂的形态与功能变化的过程，细胞周期停滞于G1期是细胞衰老的一个关键特征。目前研究较为明确的细胞衰老途径主要有两条[1]：p19ARF/p53/p21Cip1和p16INK4a/Rb途径。这两条衰老途径的关键调节因子是几个抑癌基因：p53、p19ARF、Rb和p16INK4a。一旦这些基因发生突变，细胞将发生早老或绕过衰老程序继续增殖。因此通过抑制衰老途径中相关基因表达的治疗已成为防治衰老的新策略。近年来大量文献报道性腺功能衰退与机体衰老密切相关[1，2]。研究性腺衰老机制及药物的调节作用已成为衰老研究的热点之一，而且主要集中在雄性性腺衰老的研究[2-4]，但对于雌性性腺衰老的研究报道尚少。本研究应用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型，以大鼠卵巢为研究对象，应用RTPCR、Western blotting方法检测并分析应用六味地黄汤对衰老大鼠卵巢组织p16、p19ARF、Rb表达的影响，探讨六味地黄汤在衰老途径中抗鼠性腺衰老的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 选用清洁级8周龄雌性SD大鼠75只，体重180～220 g(购自河北医科大学实验动物学部，合格证编号：605106)。根据实验目的和要求将SD大鼠随机分为以下各组，正常对照组、模型组、六味地黄汤组、VE阳性对照组，每组15只。

    1.2 动物模型的建立和4组动物的处理 用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老动物模型：用0.9%氯化钠溶液配成6%的溶液，按300 mg·kg-1·d-1给药，连续60 d，1 次/d。六味地黄汤组和阳性对照组大鼠在造模的同时每天灌胃六味地黄汤、维生素E，连续60 d。

    1.3 药物溶液的制备 六味地黄汤方剂组成：熟地黄、山茱萸、山药、牡丹皮、茯苓、泽泻等 ......