屈志钢 杨超 左燕红 黄丽娟 王鹏 赵凤云 刘运江

    在我国乳腺癌发病率以每年3%的速度递增，且发病年龄趋向年轻化。尽管目前乳腺癌的综合治疗显著改善了患者的生存期，但复发和转移风险仍然很高。目前干细胞理论认为，肿瘤中只要一小部分具有干细胞表型的肿瘤细胞移植后，就能够重新形成肿瘤，并且具有自我更新、形成不同分化程度的肿瘤的能力，肿瘤组织中肿瘤干细胞的存在及数量是肿瘤复发和转移的根源[1]。但乳腺癌干细胞一直缺乏有效的鉴别和分离方法，我们参照Xu等[2]的实验，采用流式细胞技术检测乳腺癌组织中的CD55hig的细胞比例来代替乳腺癌类干细胞，用以判断患者的预后及复发的风险。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 本研究选取2008年2月至2009年1月在河北医科大学第四医院外一科诊治的原发性乳腺癌患者45例，均为女性，年龄30～72岁，中位年龄46岁。根据国际抗癌联盟(2002版)肿瘤分期标准：Ⅰ期11例，Ⅱ期26例，Ⅲ期8例;根据腋淋巴结有无转移分为：无淋巴结转移16例，淋巴结转移1～3枚16例，淋巴结转移≥4枚13例;按乳腺肿瘤病理组织学分类标准：浸润性导管癌33例，浸润性小叶癌7例，其他类型乳腺癌5例;根据C-erbB2表达情况分为：阳性(++～+++)患者33例，阴性(-～+)患者12例;根据ER表达情况分为：阳性(+～+++)患者30例，阴性(-)患者15例;根据PR表达情况分为：阳性(+～+++)患者26例，阴性(-)患者19例;根据Ki67蛋白的表达情况分为：阳性(+～+++)患者32例，阴性(-)患者13例。选取病例中，8例曾行新辅助化疗(化疗方案为CEF方案或AC方案，化疗周期为2～4个周期)，其余均为首次就诊、未经过任何治疗的患者。研究对象的腋窝淋巴结转移状况、病理学指标根据我院组织活检和手术标本的病理报告确定，患者的临床资料来自住院病历。

    1.2 实验方法 主要仪器、主要试剂及试剂配制 见表1。

    表1 主要仪器、主要试剂及试剂配制

    1.3 实验步骤

    1.3.1 单细胞混悬液的制备：于手术中按无菌原则切取部分乳腺癌肿块，同时切取部分远离癌灶5 cm的乳腺组织作为CK19，CD55免疫荧光标记时的阴性对照，低温保存，快速到实验室处理。分别将保存的新鲜肿瘤组织及正常乳腺组织放在120目不锈钢网上 ......