张卫 刘华 赵文艳 马延 田艳生

    WHO报道，在2005年，全球有880万结核病新发病例，死亡病例160万[1]，而且，这种情况随着艾滋病及耐多药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)的流行而日趋严峻[1-3]。监测MTB耐药性是控制耐多药菌株流行的有效方法之一，然而，目前所用方法，受到检测费用高和检测时间长等不利因素的限制，因此，急需发展快速价廉的检测方法。近年来，国外学者报道用硝酸盐还原试验(nitrate reductase assay，NRA)在固体或液体培养基的基础上，直接或间接检测痰标本中MTB的耐药性，大大的缩短了结果报告时间[4-6]。然而，国外对此方面的报道仅限于1～2种药物[4-6]，且国内此方面的报道较少，因此，我们应用NRA法在液体培养基的基础上直接检测痰标本中的MTB对4种一线抗结核药物利福平(RMP)、异烟肼(INH)、链霉素(S)及乙胺丁醇(EMB)的耐药性，同比例法结果进行比较，评价该方法的临床应用价值。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 156份涂阳痰标本(≥+)来自华北石油总医院结核科2009年1月至20011年5月门诊及住院患者。

    1.2 试剂与仪器 Middlebrook 7H9培养基、OADC(oleic acidalbumin-dextrose-catalase)添加剂、PANTA(polymyxin B，amphotericin B，nalidixic acid，trimethoprim，azlocillin)添加剂均购自美国BD公司;利福平、乙胺丁醇、异烟肼及链霉素药物粉剂(美国Sigma公司);改良罗氏培养基为本室自制;H37RV标准敏感菌株(中国药品生物制品检定所)。

    1.3 方法

    1.3.1 标本处理：痰标本首先进行厚涂片抗酸染色，方法及结果判定参照文献[7]。涂阳痰标本(≥+)5～10 ml加入50 ml无菌离心管中，加等体积0.5%NaCl-NaOH(0.1 mol/L柠檬酸三钠50 ml与4%NaOH 50 ml混合后灭菌 ......