顾艳红 刘兰吉 刘波 陈旭霞 苏颖

    急性上呼吸道感染是儿科最常见的疾病之一，引起急性呼吸道感染的病毒群至少有7个病毒科10多类共239个型别的病毒[1]。儿童上呼吸道感染的病毒病原学研究尚缺大样本的系统研究。2009年，甲型H1N1流行性感冒在全世界爆发[2]。2010年8月，世界卫生组织(WHO)宣布2009甲型H1N1流感进入大流行后阶段[3]。秦皇岛地区位于燕山山脉东段丘陵地区与山前平原地带，气候类型属于暖温带半湿润大陆性季风气候。但受海洋影响较大，四季分明。我院为三级甲等医院，患者来自覆盖秦皇岛地区的三区、四县。为调查在该特定背景下我市儿童急性上呼吸道感染夏冬季节的病毒感染特征，我院采用多重PCR方法进行系统的相关研究。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象 依据上呼吸道感染诊断标准[4]，选取来秦皇岛市第一医院门诊就诊的0～14岁急性上呼吸道感染患儿：2010年6月至2010年8月共191例，因标本破碎、病史记录不清等剔除22例，送检标本169份。其中男91例，女78例;年龄0～1岁26例，1～岁48例，3～岁48例，6～14岁47例。2010年11月至2011年1月共182例，因标本破损、病史记录不全剔除30例，送检标本152份。其中男85例，女67例;年龄：0～岁19例，1～岁49例，3～岁43例，6～14岁41人。入选病例病程均在72 h内。

    1.2 分组 按性别分男组，女组。按年龄分0～岁组、1～岁组、3～岁组、6～14岁组。按季节分夏季组、冬季组。按病程分：病程0～ h组，24～ h组，48～72 h组。以外周血超敏C-反应蛋白(CRP)≤5 mg/L为正常值，>5 mg/L为升高，分成2组。按有无基础疾病分：既往健康组，存在先天性心脏病、营养性贫血、免疫功能低下、反复呼吸道感染等基础疾病组。

    1.3 实验方法及步骤 本实验共采用3组PCR引物用于检测15种呼吸道病毒。第1组引物用于扩增腺病毒A/B/C/D、冠状病毒229E/NL63、1、2、3型副流感病毒;第二组引物用于扩增冠状病毒OC43/HKU1、鼻病毒A/B/C、甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒A、呼吸道合胞病毒B;第3组引物用于扩增博卡病毒1/2/3/4、乙型流感病毒、偏肺病毒、副流感病毒4型、肠道病毒。

    1.3.1 标本采集：入选患儿均在就诊时进行标本采集：选用专业的绒毛拭子从患儿咽后壁涂抹咽部分泌物标本，立即至于保存液中，置于-70℃低温冰箱保存直至检测，记录患儿病史、症状及体征。

    1.3.2 实验方法 ......