马淑芹 张庆波 李博 幺文博 胡万宁 杨雷 王宗会 王静怡

    癌症严重威胁着人类的生命健康，食管癌是其之一，我国食管癌病死率为15.02/10万，在我国居恶性肿瘤的第四位。传统的癌症治疗方法是手术、放疗和化疗，但均存在有一定的缺点和不足，由于肿瘤本身的侵袭和复发的生物学系特性，使治疗效果受限。随着免疫学理论和分子生物学知识的不断发展和突破，肿瘤生物疗法成为控制和消除肿瘤的新途径，肿瘤免疫疗法是肿瘤生物疗法的重要组成部分。本研究应用超抗原金葡素C型(staphlococcal enterotoxin，SEC)联合食管癌肿瘤可溶性抗原(tumor soluble antigen，TSA)构建肿瘤疫苗，刺激PBMC增值，诱导产生细胞毒性T细胞(cyctotoxic T lymphocyte，CTL)，对肿瘤细胞进行杀伤，并对其有效成分进行分析，以探讨其治疗癌症的可行性。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂：PBMC分离液(天津TBD公司)，RPMI-1640(Gibco公司)，超抗原SEC(购于沈阳协和集团)，CCK-8(武汉碧云天公司)，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD19/CD3/CD4/CD8(美国BD公司)，ELISA试剂盒(美国R＆D公司)，3H-Tdr(中科院原子能所)。

    1.1.2 肿瘤细胞系：人食管癌细胞株Eca109，宫颈癌细胞株Hela，由河北联合大学医学实验中心提供。

    1.2 方法

    1.2.1 PBMC的分离：取正常献血者外周血10ml，肝素抗凝，用Ficoll细胞分离液(比重：1.077)分离PBMC。用生理盐水洗细胞三次，计数细胞数，置于含10%人AB型血清的RPMI-1640培养基。

    1.2.2 食管癌抗原的制备：培养食管癌细胞 ......