崔文华 底建敏 张国华 陈冀英

    人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)在妊娠期活动性感染可经宫内传播，可导致流产、胎儿畸形、死胎、胎儿宫内发育迟缓、先天性智力低下、听力损害、小头畸形、颅内钙化、脉络膜视网膜炎以及出生后神经系统发育落后等[1，2]。治疗孕期HCMV活动性感染是阻断HCMV宫内传播，预防HCMV宫内感染重要手段。但目前缺乏安全有效治疗药物。我们研究证实：JYBD具有抗HCMV和豚鼠巨细胞病毒作用[3，4]，因它为中药复方制剂，成分较多，药理作用复杂，作用靶点多，抗病毒分子机制不明。小鼠巨细胞病毒(MCMV)与HCMV生物学特征相似，故通过研究，JYBD对MCMV感染及影响因素，来推测JYBD对HCMV致病分子机制，中药JYBD制剂是否影响MCMV感染细胞的病变情况及HSP70表达，是否通过影响MCMV感染细胞HSP70表达而发挥抗病毒作用，我们通过选体外实验方法，观察中药JYBD制剂对MCMV感染细胞的病变情况及HSP70表达影响。以探讨中药JYBD制剂抗病毒分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 病毒与细胞：病毒MCMV Smith株购于美国典型培养物保藏中心，按常规方法滴定，并测定半数细胞感染剂量(TCID50)。小鼠胚肺细胞NIH3T3株购于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，细胞按常规方法培养传代。

    1.1.2 实验药物：中药JYBD注射剂，20 ml/Amp，含生药量1 g/ml，用0.22μm微孔滤器过滤除菌，4℃保存备用。阳性对照药物：更昔洛韦(GCV)粉针剂，50 ml/支。

    1.1.3 主要试剂：高糖MDEM培养基为美国Gibico公司产品，鼠抗鼠HSP70 McAb为美国Santa Cruz公司产品，生物素化山羊抗鼠IgG及SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑盐(MTT)均购自美国Sigma公司。

    1.2 方法

    1.2.1 病毒毒力测定：常规测定MCMV Smith株TCID50=10-5。

    1.2.2 药物毒性试验：用MTT、细胞病变法测JYBD、GCV最大无毒浓度TD0，两种方法测得结果一致 ......