何平

    肢体缺血-再灌注(LIR)不仅可以造成缺血组织严重损伤，而且可致心肌损伤。本试验观察LIR所致心肌损伤的影响，并探讨其可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 标本:健康雄性Wistar大鼠，体重210～260 g，由本院动物中心提供。自由进食、饮水，自然光照，室温(25.2±2.0)℃，分笼常规喂养。

    1.2 试剂 丙二醛(MDA)试剂盒，黄嘌呤氧化酶活力(XOD)试剂盒，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物制品公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 动物分组 动物随机分为2组，每组10只。①IR组:按模型操作。②对照组(Control组):橡皮带松弛环绕肢体，不阻断血流，其余操作同IR组。

    1.3.2 模型制备及标本采集:Wistar大鼠试验开始前需禁食12 h，允许自由饮水。采用我科室常规方法[1]复制大鼠LIR模型:经乙醚浅麻醉下，用适度松紧的橡皮带环绕结扎大鼠双后肢根部以阻断血流4 h，松解橡皮带再恢复血流灌注2 h。各组动物在再灌注2 h时穿刺腹主动脉取血并提取组织标本，血液经3 500 r/min离心15 min，所得血浆标本分装在干净的Eppendorf管中，-70℃保存备用。同时立即开胸取出心脏，迅速纵向剖开左心室，冷磷酸盐缓冲液(PBS)充分冲洗，用滤纸吸干表面水分，液氮速冻，-70℃储藏备用。此外，每组随机取5份新鲜心脏标本，于心尖部位横断面切取组织块(长约0.5 cm)迅速投入10%甲醛溶液中固定，次日更换固定液，石蜡包埋后备用。

    1.3.3 观测指标

    1.3.3.1 10%心肌组织匀浆的制备:应用扭力天平称取已冻存的心肌组织200 mg，在蜡板上用眼科剪将其细细剪碎，移入装有2 ml冷0.9%氯化钠溶液的匀浆管中，冰浴条件下电动匀浆3 min。匀浆液经3 500 r/min离心15 min后，收集上清液，测定所需要的心肌组织各项生化指标。

    1.3.3.2 心肌组织MDA的测定:①测定原理:MDA是过氧化脂质降解的产物 ......