任莉莉 问明 李淑青 宋子正 商琰红 王素云 魏影非

    白血病是一类起源于骨髓多能干细胞的恶性克隆性疾病，其发生和发展的主要原因是白血病细胞不能有效的激活T细胞而逃脱宿主免疫系统监视和清除。树突状细胞(DCs)是能激活初始型T细胞(native T cells)的专职抗原递呈细胞(APC)[1]，在激发抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)引起的过继性免疫治疗肿瘤中具有重要地位，成为肿瘤免疫治疗研究的热点。但体内DCs的含量很少，难以满足临床应用的需要。研究表明，DCs可在体外诱导、扩增，并可体外有效激活、诱导特异性抗肿瘤免疫。但DCs体外培养需要大量细胞因子，有研究也通过体外试验证实，应用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)，仅可使部分慢性髓性白血病(CML)原代细胞分化为DCs，且表面免疫分子表达低于正常细胞来源的 DCs，特别是 CD80、HLA-DR[2]。并且从急性髓细胞白血病(AML)细胞诱导培养DCs比CML细胞困难，以往的试验相对集中在CML来源，AML来源研究的较少，因此，有必要进一步探索提高体外诱导AML来源DCs质量的方法。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 重组人GM-CSF由华北制药金坦公司惠赠;重组人IL-4为美国Pepprotech公司产品，比活性13 U/ng;异硫氰酸荧光素(FITC)-CD1a单抗、FITC-CD80单抗、藻红朊荧光素(PE)-CD83单抗、PE-HLA-DR单抗为美国B-D公司产品;IFN-γ试剂盒为深圳晶美生物工程公司。噻唑兰(MTT)购于Ameresco公司。药品:参附注射液由雅安三九药业有限公司提供;批号:050802。人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞株由中国协和医科大学天津血液病研究所惠赠。

    1.2 仪器 洁净工作台(苏州净化设备厂)，恒温CO2细胞培养箱(美国SHELDON公司)，低速离心机(日本KUBOTA)，倒置显微镜(日本Olympus公司)，流式细胞仪(Vantage美国B-D公司)，酶标仪(北京Bintag公司)。

    1.3 方法 DCs的培养和测定参照 Choudhury等[1，2]的方法，并加以改良。

    1.3.1 体外诱导HL-60DCs:取HL-60细胞(调节细胞浓度为5×105/ml)，选用 IL-4+GM-CSF(终浓度分别为 50 ng/ml、100 ng/ml)、不 同 浓 度 的 SFI(9.38 mg/ml、18.75 mg/ml、37.5 mg/ml、75 mg/ml、150 mg/ml ......