满一 沈国华 钟良军

    白斑是公认的最常见的癌前病变之一，上皮过度增生或不典型增殖是其特点，是上皮细胞数量由单纯增加向细胞质量癌变转化的中间阶段，在这个转变过程中不仅有细胞的过度增殖，同时还存在细胞凋亡异常，凋亡失控在细胞恶变的起始过程发挥作用[1，2]，近年来Bcl-2凋亡家族中的Bax蛋白在细胞恶性转化早期阶段中的抑癌作用受到重视[3]，但此类研究报道笔者较少见。本研究通过观察分析口腔白斑中Bax蛋白的表达状况，探讨口腔黏膜上皮恶变转化中Bcl-2蛋白生物学行为，有助于临床早期诊断和防治。

    1 材料与方法

    1.1 材料 选择2007年4月至2009年6月中国石油天然气集团公司中心医院保存的的石蜡切片54例，其中正常口腔黏膜25例，白斑29例;所有检材诊断和组织学均依据WHO标准，由同1名经验丰富的病理学专家完成。

    1.2 试剂 所有试剂均购自福州迈新生物技术有限公司。Bax为即用型鼠抗人单克隆抗体，SP复合物MaxVisionTM为快捷即用型。DAB显色试剂盒为链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HPR)免疫组化染色EnVision系统，适用于链霉素-过氧化物酶免疫组织化学染色方法(streptavidin-peroxidase，SP)。

    1.3 实验方法 采用免疫组化SP法染色检测细胞凋亡与增值状况。所有组织切片经10%甲醛固定、常规脱蜡、透明、浸蜡、石蜡包埋。5 μm连续切片，固定于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，常规组织切片脱蜡入水;微波加热10 min暴露抗原;过氧化物酶溶液阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS水冲洗，鼠抗人即用型Bax抗体37℃孵育60 min，加入SP复合物HRPMarVisionTM，30℃孵育60 min;加入SP复合物HPR，4℃过夜;DAB缓冲液、DAB底物、DAB色原顺序加入、混匀成DAB显色液滴定组织切片，室温下显色10 min，显色后苏木素复染，常规脱水，二甲苯透明，封片。以PBS(0.01 mol/L，pH值 7.4)代替一抗为阴性对照，胃癌阳性染色切片为Bax的阳性对照(福州迈新生物技术公司提供)。

    1.4 阳性判断标准 采用HM2A8-2000高清晰度彩色医学图文分析系统 ......