王鹏 王敬 李乐 霍峰 王笑茹 李春辉

    近年来，舌癌的基础和临床研究均取得了很大发展，深入研究其发生、发展机制，全面揭示其生物学特性，对判断其恶性程度，指导临床治疗和评估预后具有重要意义。目前有关环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，Cox-2)、β 连环蛋白(β-catenin)和凋亡抑制基因Survivin 蛋白与肿瘤的增殖、抗凋亡等关系的研究日益受到人们关注[1-3]。本研究采用RT-PCR 方法检测舌癌组织及正常口腔黏膜中Cox-2 mRNA、β-catenin mRNA 及Survivin mRNA 的表达情况，旨在探讨其在舌癌发生、发展过程中的作用及相关性。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料收集我院口腔科2006 至2011 年手术切除及活检后经病理诊断明确的存档舌癌标本60 例，其中男37 例，女23 例;年龄40 ～75 岁;所有患者手术前均未经放疗、化疗或免疫治疗;所有舌癌病例均经承德医学院附属医院病理科资深医师组织病理学证实，病理诊断标准参照WHO 2002 年《头颈部肿瘤病理学与遗传学》，其中高分化19 例(高分化组)，中分化26 例(中分化组)，低分化15 例(低分化组)。收集舌外伤、舌修整正常舌黏膜组织30 例为正常对照。

    1.2 标本处理检测标本置-70℃液氮中保存。

    1.3 主要试剂(1)总RNA 提取试剂异硫氰酸胍(Trizol Reagent):美国Invitrogen Life technologies 公司;(2)反转录酶(AMV);(3)RNA 酶抑制剂;(4)dNTP 混合液;(5)Oligo(dT)15;(6)γ-Taq DNA 聚合酶;(7)目的基因引物:2 ～7 均购自日本TaKaRa 公司;(8)琼脂糖:购自美国Promaga 公司。

    1.4 主要设备小型台式离心机(SIGMA，1-13)，PCR 扩增仪(德国Biometra)，紫外分光光度计(UV-visible Spectrometer，UV300)，电泳仪(BIO-RAD，PowerPac200)，Chemi Imager 5500凝胶电泳成像分析系统(Alphain-notech chemi Imager)。

    1.5 方法

    1.5.1 总RNA 的提取:TRIZOL 法提取组织总RNA，将-70℃冻存的组织取出，称取100 mg，在EP 管中剪碎 ......