朱桂云 杨永辉 安晓颖 康丽菲 陈宁 欧阳琴

    我国是结核病高发国家之一，每年新增结核病患者约150万。在结核病防治中，我们面临的最大难题之一就是如何快速准确地诊断结核。γ-干扰素释放试验是一种新的诊断结核的辅助手段，因其具有较高的敏感性和特异性，已受到临床越来越广泛的重视[1]。目前有两种较为成熟的γ-干扰素释放试验方法，即酶联免疫吸附法(ELISA)和酶联免疫斑点法(ELISPOT)[2，3]，本研究选用分别采用这两种方法的结核杆菌特异性细胞免疫反应(A.TB)试剂盒和结核感染T 细胞斑点试验(TSPOT.TB)试剂盒进行γ-干扰素释放试验，对比研究检测结果的一致性，探讨二者的临床应用价值。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料随机选取2012 年1 至6 月初次在我院住院的临床诊断为肺结核和待排除肺结核的患者70 例，其中男38例，女32 例;年龄22 ～53 岁，平均年龄37.6 岁。70 例患者中有44 例确诊为肺结核(以痰涂片发现抗酸杆菌或结核分枝杆菌培养阳性为标准)，剩余的26 例均为排除肺结核的诊断，其中普通细菌感染引起的肺炎19 例，肺癌4 例，间质性肺炎2例，结节病1 例。

    1.2 仪器与试剂CO2培养箱，水浴锅，酶标仪。T-SPOT.TB试剂盒(英国Oxford Immunotec Ltd 生产)，A.TB 试剂盒(海口维瑅瑷生物研究院生产)，RPMI1640 培养液，PBS 缓冲液，AIMV 培养液，淋巴细胞分离液。

    1.3 方法

    1.3.1 T-SPOT.TB 检测:①外周血单个核细胞的分离、收集与计数:每个入选病例采集4 ml 外周血标本置于肝素锂抗凝的试管中，立即混匀，在4 h 内进行PMBC 分离。即加入等体积的RPMI1640 培养液混匀后缓慢加在4 ml 淋巴细胞分离液上层，2 500 r/min水平离心22 min 后吸取中间层云雾状细胞(PMBC)。在PMBC 中加入RPMI 1640 至10 ml，1 900 r/min 水平离心7 min，弃去上清液。加入 AIM-V 培养液至10 ml ......