牛尚梅 马慧娟 刘晶 高哲 李彩英 马博清

    游离脂肪酸(FFA)水平升高在肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病中发挥重要作用[1]。不同类型脂肪酸与胰岛素敏感性关系不尽相同，其中长链饱和与不饱和脂肪酸与胰岛素抵抗(IR)关系密切。实验表明给予大鼠高饱和脂肪酸饮食可以导致大鼠IR[2]，具体机制尚不十分清楚，可能与骨骼肌过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγ coactivator 1α，PGC-1α)的转录调控有关。PGC-1α是一种核转录共激活因子，其在线粒体功能和IR中的作用成为近年来研究的热点。动物研究发现Zucker糖尿病肥胖大鼠骨骼肌PGC-1α表达下调[3]。高脂与PGC-1α表达，IR关系密切。本研究拟采用不同类型长链脂肪酸培养C2C12肌细胞，探讨脂肪酸类型及浓度对骨骼肌PGC-1α表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 实验用脂肪酸购自Sigma公司，C2C12细胞株购自北京协和细胞库。目的引物由上海生物工程公司合成，β-actin 上游引物:5’-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3’，下游引物:5’-TCC ACCACCCTGTTGCTGTA-3’;PGC-1α 上游引物5’-TCAGTCCTCACTGGTGGACA-3’，下游引物 3’-TGCTTCGTCGTCAAAAACAG-3’。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养与传代:C2C12肌细胞贴壁生长于含20%小牛血清、0.6/L谷氨酞胺，6.672/LHEPES，100 U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI1640中，于37℃，5%CO2孵箱培养。以1X106/培养瓶传代细胞，3天后分别予 0 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、0.75 mmol/L 软脂酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸和亚油酸处理细胞 ......