许新明 王莉 刘明 徐袁秋

    ·论著·

    吡柔比星在骨肉瘤细胞放射增敏中的作用研究

    许新明 王莉 刘明 徐袁秋

    目的 研究吡柔比星在骨肉瘤细胞MG-63的放射增敏中的作用。方法用MTT法检测不同浓度吡柔比星对对数生长期的MG-63细胞的抑制作用，确定IC10的数值，作为实验的药物浓度。用克隆形成分析法测定MG-63细胞在IC10浓度吡柔比星作用24 h后给予不同剂量(0、2、4、6、8Gy)照射以及IC10浓度紫杉醇作用不同时间(12、24、36 h)后给予一定剂量射线照射的存活分数(SF)，拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比，分析吡柔比星作用于MG-63细胞不同时间(12、24、36 h)后细胞生存率的变化。结果不同浓度吡柔比星作用24 h后，MG-63细胞抑制率逐渐增高(P1 材料与方法

    1.1 细胞株、药物和试剂 本研究所用骨肉瘤细胞株MG-63由河北医科大学第三医院实验中心提供，为单层贴壁生长；吡柔比星由浙江海正药业公司生产(生产批号：121201)；DMEM和胎牛血清购自HyClone公司；噻唑蓝(MTT)和二甲基亚砜(DMSO)由购自Solarbio公司。

    1.2 细胞培养 采用含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的DMEM培养液，置于含5%CO2、37℃恒温的培养箱培养，0.25%胰酶消化、传代，取对数生长的细胞进行实验。

    1.3 照射条件及方法 采用直线加速器(Varian IX)产生的6 MV X线进行照射，剂量率为300 cGy/min，细胞面覆盖硅胶与放射源距离为100 cm，室温下照射。

    1.4 实验方法

    1.4.1 MTT实验：将对数生长期的细胞用胰酶消化后调整细胞密度至3×104/ml，接种于96孔培养板，每组6个复孔，每孔100 μl，培养12～16 h至细胞贴壁，将吡柔比星按比例稀释加入96孔板，同时设对照组及调零孔。置37℃培养箱培养24 h后每孔加入新鲜配制的MTT(5 mg/ml)15 μl，再次孵育4 h，弃去上清液，每孔加入DMSO 150 μl，震荡10 min，于酶标仪上测定各孔吸光度(测定波长520 nm)并计算IC10。实验重复3遍。细胞抑制率=(1-A加药/A对照)×100%。

    1.4.2 克隆形成分析实验：将细胞常规消化后分别按不同照射剂量以不同密度接种于6孔板，培养12～16 h至贴壁，按分组要求加入药物、进行照射，照射完成后于37℃培养箱培养10～14 d，取出培养板 ......