胡艺琼 方玲 郭昌云 刘先哲 余旻 鲍容辉 李冠兰 滕林 余静

    国内外实验已证明 AngⅡ与TGF-β关系密切，AngⅡ能促进多种细胞中TGF-β的表达。AngⅡ修饰动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)中炎性反应的许多步骤而影响AS的发展[1]。大部分学者认为TGF-β在AS中起保护性作用，即抑制AS中炎症的发生，延缓AS的发展，活化的 TLR2促进内膜粥样斑块的形成[2-4]。本课题前期实验已经证实了AngⅡ能够上调体外培养的HT-1080中TLR2表达。本次试验首次采用TGF-β和TGF-β的抑制剂Decorin刺激体外培养的人成纤维细胞，观察TGF-β在AngⅡ促TLR2表达中的影响，从而在分子水平上探讨AS的发病机制，并为临床治疗AS提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及主要试剂 HT-1080细胞(人成纤维细胞)(武汉典型培养物保藏中心细胞库)，Dulbecco改良Eagle培养基DMEM(GIBCO)，小牛血清(杭州四季青生物技术有限公司)，胰蛋白酶(Sigma公司)，血管紧张素II(Sigma公司)，TGF-β(PeproTech Asia公司)，TGF-β抑制剂Decorin(R＆D公司)，Trizol试剂购自上海生工生物工程技术服务有限公司;实时定量PCR各种试剂均购自 Promega;DNA Maker购自 TaKaRa公司。

    1.2 方法

    1.2.1 HT-1080的传代培养及分组:收到定购的细胞后先将培养瓶内的培养液在超净工作台内用吸管全部吸出，置于另一无菌容器，再向培养瓶中加入1 ml胰蛋白酶，37℃消化直到细胞脱落，换新的培养瓶，加入吸出的培养液，在37℃，5%CO2培养箱培养，当细胞生长到90% 以上单层融合状态时，即可加入胰蛋白酶进行消化，按1∶2进行传代培养。细胞分为:①正常对照组:取2瓶处于对数生长期的HT-1080细胞进行1∶2传代(传代后调节细胞浓度为104/ml，每瓶接种细胞悬液5 ml)，正常培养至24 h。②阴性对照组:取2瓶处于对数生长期的HT-1080细胞进行1∶2传代(传代后调节细胞浓度为 104/ml ......