赵轶群 王丽娜 刘永亮 王鹏

    ·论著·

    MMP-9和咬合蛋白在弥漫性脑损伤大鼠皮层的表达变化及与脑水肿的关系

    赵轶群 王丽娜 刘永亮 王鹏

    目的观察弥漫性脑损伤大鼠脑水肿及损伤区皮层MMP-9和咬合蛋白表达的变化。方法成年健康SD雄性大鼠160只,按随机数字表法分为对照组(n=60)和模型组(n=100)。应用Marmarou’s法建立弥漫性脑损伤大鼠模型。2组分别于术后3、12、24、72、144 h行干湿重法检测2组大鼠脑组织含水量变化，行免疫组化和Western blot检测损伤区周围皮层MMP-9和咬合蛋白表达水平。对各结果进行相关性分析。结果与对照组比较，模型组各时间点大鼠脑组织含水量明显增加，脑组织损伤区周围皮层MMP-9表达明显增高(P1 材料与方法

    1.1 动物分组 成年SD雄性大鼠160只，清洁级,平均体重(300±20)g，购自北京维通利华公司(合格证：SCXK(京)2002-003)，于河北联合大学动物实验中心，在常温下常规饲料喂养。所有动物实验遵循国际生命指导中心关心和使用动物实验原则。按随机数字表法分为对照组(n=60)和模型组(n=100)。

    1.2 模型制备 参考Marmamu法[1]制作大鼠弥漫性脑创伤模型：乙醚麻醉动物(麻醉时间约为70～150 s)，将麻醉好的大鼠俯卧位固定于海面床垫(10 cm×20 cm×30 cm)上，将质量450 g、直径18 mm的铜棒自1.5 m高度垂直落下撞击置于大鼠冠状缝与失状缝正中的不锈钢垫，造成大鼠弥漫性颅脑创伤模型。正常对照组动物只进行乙醚麻醉而不致伤。在模型制作过程中死亡32只，给予补充。

    1.3 脑组织含水量测定 随机选取2组各时间点大鼠各5只，以10%水合氯醛麻醉，断头处死，开颅取脑，从损伤区周围取200 mg左右的脑组织，采用MA110电子分析天平(上海第二天平仪器厂)称湿重并记录后置于105℃恒温干燥箱内干燥48 h至恒重，称干重后按Elliot公式计算脑含水量：脑含水量=(湿重-干重)/湿重×100%。

    1.4 免疫组化检测脑损伤周围皮层MMP-9和咬合蛋白表达变化 随机选取2组各时间点大鼠各5只，10%水合氯醛深度麻醉后开胸,4%多聚甲醛灌注,断头取脑,置于4%多聚甲醛液中4℃冰箱过夜至组织块沉底。冠状切取2 mm厚包含损伤区域及左右半球的组织块浸于4%多聚甲醛中再固定4 h。经自来水冲洗48 h，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。将石蜡包埋的组织块取出放入切片机中做连续切片,片厚5 μm ......