屈鹏飞 李浩波 陈彪 贾志宇 赵云转 张睿 杨威 张英怀

    类风湿关节炎是一种慢性的炎症性疾病，其特征为破骨细胞介导的骨质破坏和关节软骨的破坏[1]。甲氨蝶呤(MTX)是一个单甲基的氨基蝶呤，近年来被广泛地使用，是最有效的治疗类风湿性关节炎的临床药物之一。甲氨蝶呤和氨基蝶呤由于能够通过抑制一种控制核酸合成的酶(二氢叶酸还原酶)来抑制DNA合成，因此在抗肿瘤的方面，也有着非常显著的药效[2]。近年来在对类风湿性关节炎的患者治疗过程中，低剂量的甲氨蝶呤被广泛的用来抑制关节炎症[3]，但是最近的研究表明，甲氨蝶呤在一些类风湿性关节炎的治疗过程中，出现了效果不良，并且可能是因为给药过程中，因为其拮抗剂的潜在可能，而导致了效能极大降低[4，5]。本研究主要是在大鼠的全骨髓细胞的培养体系中脱氧腺苷与甲氨蝶呤的拮抗现象和在佐剂引导的关节炎动物试验模型中腺苷脱氨酶水平的变化来初步研究甲氨蝶呤对腺苷脱氨酶的抑制现象，并通过目前的证据发现腺苷脱氨酶可能为甲氨蝶呤的一个分子靶，并以此来解释在类风湿关节炎治疗过程中，造成甲氨蝶呤治疗效果不良的形成机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 实验动物4周龄SD雄性大鼠(清洁级，体重100～120 g)和5周龄雌性Lewis大鼠(清洁级，体重100～120 g)，由九动株式会社(鸟栖，日本)提供，所有的动物试验都是根据九州大学制定的护理和使用动物指南而进行的。

    1.2 主要试剂及仪器 α-Minimum Essential Medium(αMEM;cat#12000-022)胎牛血清和青霉素购于Invitrogen公司(大岛，纽约)。1，25-(OH)2D3购于英国普利茅斯生物研究实验室。腺苷脱氨酶抗体(H-300):SC-25747购于圣克鲁斯生物技术(美国加利福尼亚州圣克鲁斯)。第二抗体:Alexa Fluor?488 Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)和(ECL)试剂盒购于Technologies Corporation(东京，日本)。甲氨蝶呤，脱氧核苷和免疫染色试剂盒购于美国Sigma公司。Kat1表面抗体由九州大学口腔分子解剖学实验室提供。

    1.3 骨髓培养系统 全骨髓细胞培养系(破骨细胞形成系):将4周龄SD雄性大鼠用异氟烷麻醉后 ......