王恒 邵恩得 张金荣 吴立华

    ·论著·

    胆囊收缩素-8对高血压大鼠脑出血后核因子-κB活性的影响

    王恒 邵恩得 张金荣 吴立华

    目的探讨胆囊收缩素-8(cholecystokinin-8,CCK-8)对高血压性大鼠脑出血后血肿周围组织核因子-κB(Necular Factor Kappa B,NF-κB)活性的影响。方法取成年SD大鼠72只，体重250～300 g，随机分假手术组(n=12)、脑出血组(n=24)和CCK-8治疗组(n=24)。采用电泳迁移率改变分析方法(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)检测核内NF-κB的活性，用免疫组化方法观察NF-κB 在细胞内的表达情况，并用干湿重法测量出血侧脑组织含水量。结果脑出血组各时间点NF-κB的活性以及脑含水量较假手术组和CCK-8治疗均有明显增高(P1 材料与方法

    1.1 动物分组与模型制备 成年SD大鼠72只，体重250～300 g，随机分为假手术组(12只)、脑出血组(24只)、CCK-8治疗组(24只)，后两组按出血后时间分为12、24、72 h三个亚组，每组8只大鼠，大鼠高血压性脑出血模型采用双侧肾动脉前支部分热凝，立体定位仪下自体血脑内注入法建立。CCK-8治疗组于出血前30 min,按40μg/kg，经尾静脉注射CCK-8(美国Sigma公司)，0.2 ml/只；脑出血组于试验前30 min注射等量0.9%氯化钠溶液，即0.2 ml/只；假手术组大鼠只制作大鼠高血压动物模型，不进行其他操作。将各组动物按时间点断头处死，取出血灶前缘2 mm处脑皮质100 μg，放于-70℃冰箱保存，用做电泳迁移率改变分析NF-κB的活性，另取出血灶边缘(200±50)mg脑皮质，用干湿重法测量脑含水量。剩余出血边缘脑组织用4%多聚甲醛固定、脱水、包埋。将脑组织切成4 μm厚薄片，用免疫组化方法观察脑出血后大鼠脑组织NF-κB的表达情况。

    1.2 NF-κB的活性测定 参照Dignam等[2]的方法稍加改进。取出血灶边缘2 mm处脑皮质100 μg，4℃下经磷酸盐缓冲液(PBS)充分洗涤，离心(1 850×g,5 min)，加入5倍体积的BufferA(10 mmol/L HEPES，1.5 mmol/L MgCl2，10 mmol/L KCl，0.5 mmol/L DTT，0.5 mmol/L PMSF，pH值7.9，0.5% NP-40)，离心(1 850×g、4℃、5 min)，向细胞沉淀中加入3倍原体积的BufferB(不含NP-40的BufferA) ......