于文静 闻海丰 秦瑾 冯忠军

    消毒剂常被医疗机构应用于各种医疗设施和环境表面的消毒[1]，在预防和控制病原菌在医院内的传播方面起到了重要的作用，但消毒剂的长期广泛使用有可能使细菌产生对消毒剂环境的适应，导致对消毒剂产生抗性。近年来国内外学者已从多重耐药鲍曼不动杆菌中检出携带耐消毒剂基因qacEΔ1-sul1的菌株，且携带率较高[2-5]。鲍曼不动杆菌具有极强的环境适应能力和获得外源性耐药基因的能力[6]。因此做好鲍曼不动杆菌耐消毒剂基因qacEΔ1-sul1的监测，了解其对常用消毒剂的抗性，将有助于合理选择与使用消毒剂，对控制其传播有重要的意义。本文对临床分离的73株多重耐药鲍曼不动杆菌qacEΔ1-sul1基因的携带情况及其含氯消毒剂的耐受状态进行研究。

    1 材料与方法

    1.1 菌株来源 试验菌株分离自河北医科大学第三医院2012年10月至2013年6月住院患者及其住院环境的送检标本(排除同一患者重复分离菌株)，其中男50例，女19例;年龄1～89岁。标本来源主要为:痰液37株、血液5株、伤口分泌物22株、ICU环境表面分离4株，尿液、导管、腹水、脑脊液、咽试子各1株。标本来自科室主要是ICU 29株，创伤急救中心11株，急诊科7株，其余菌株分布在不同的科室。全部菌株均符合多重耐药菌的标准，经ID32E鉴定试剂卡鉴定后，采用滤纸保存法，冻存于-80℃备用。

    1.2 主要仪器与试剂ABI7300型荧光定量PCR检测仪为美国生物应用公司产品，肠杆菌科和其他非苛氧革兰阴性鉴定试剂为由法国生物梅里埃公司产品，DNA Marker 1由广东东盛生物技术有限公司提供，绿色体系[Green PCR Master Mix(2x)]由Fermentas提供，核酸染料GoldViewⅠ由北京索莱宝科技有限公司提供;含氯消毒剂为泡腾消毒片Ⅱ型，主要成分为三氯异氰尿酸，由山东利尔康消毒科技股份有限公司提供。

    1.3 方法

    1.3.1 菌悬液制备:在含有菌株的EP管中加入2 ml营养肉汤，孵育过夜，后接种到哥伦比亚血琼脂培养基上，孵育过夜后取典型的菌落，悬浮于2 ml 0.9%氯化钠溶液中，配制成0.5麦氏浊度的菌悬液备用。

    1.3.2 药敏试验:采用纸片扩散法测定13种抗菌药物的敏感性，包括哌拉西林、头孢他啶、亚胺培南、头孢哌酮、头孢曲松、庆大霉素、环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。由温州市康泰生物科技有限公司提供，质控菌株为大肠杆菌ATCC25922 ......