郭立霞 徐育冬 王浩 朱明华

    ·论著·

    肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对佐剂性关节炎大鼠滑膜中TNF-α、TGF-β1和VEGF表达的影响

    郭立霞 徐育冬 王浩 朱明华

    目的探讨肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对佐剂性关节炎大鼠滑膜中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将成年雄性Wistar大鼠随机分为5组，Ⅱ～Ⅴ组建立佐剂性关节炎大鼠(AA)模型，于造模后第12天开始Ⅲ组给予甲氨喋呤灌胃治疗，Ⅳ～Ⅴ组给予益赛普皮下注射治疗。第28天取膝关节滑膜，常规HE染色，计算滑膜病理积分，免疫组织化学染色检测TNF-α、TGF-β1和VEGF在膝关节滑膜的表达。结果正常对照组大鼠滑膜组织均有少量TNF-α、TGF-β1和VEGF的表达，Ⅱ～Ⅴ组较Ⅰ组均明显增高(P0.05)。Ⅲ～Ⅴ组滑膜组织TGF-β1、VEGF的表达均明显低于Ⅱ组，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 动物与试剂 动物 Wistar大鼠90只，雄性，体重140～160 g，由河北省实验动物中心提供，合格证号 802120，许可证号SCXK(冀) 2003-1-003。完全弗氏佐剂(FCA，10 ml)购于Sigma公司，卡介苗(BCG，50 mg/支) 购自华瑞创新生物科技开发中心。TNF-α免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物制品公司，TGF-β1、VEGF免疫组化成套试剂盒购自晶美生物制品公司。

    1.2 分组及AA大鼠模型的建立 将90只雄性Wistar大鼠采用数字表法随机分为5组，分别编号Ⅰ～Ⅴ组，Ⅰ组10只，Ⅱ～Ⅴ组，每组20只。Ⅰ组为正常对照组，Ⅱ组为单纯造模组，Ⅲ组为造模+甲氨喋呤组，Ⅳ组为造模+益赛普低剂量组(0.44 mg/kg)，Ⅴ组为造模+益赛普高剂量组(0.88 mg/kg)。将FCA与卡介苗配置为含BCG 10 mg/ml 的水包油乳剂。试验第一天在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组大鼠的尾根部皮内注射该乳剂0.2 ml致炎，诱发佐剂性关节炎。而正常对照组大鼠的尾根部皮内注射等量0.9%氯化钠溶液。

    1.3 给药 于致炎后第12～23天Ⅳ、Ⅴ组皮下注射益赛普，Ⅳ组予以益赛普0.44 mg·kg-1·d-1，Ⅴ组予以益赛普0.88 mg·kg-1·d-1。给药容积均为0.1 ml/100 g，连续12 d。Ⅲ组大鼠给予甲氨喋呤2.7 mg·kg-1·周-1灌胃，Ⅱ组大鼠蒸馏水灌胃0.5 ml·只-1·d-1；给药时间均固定在每天上午9∶00 ......