申叶春 曹岩 蔡艳霞 张凡

    ·论著·

    不同淋巴结转移潜能口腔鳞癌细胞株的形态学分析及流式细胞周期分析的研究

    申叶春 曹岩 蔡艳霞 张凡

    目的探讨口腔鳞癌不同转移潜能细胞株形态学的变化，及对细胞周期、凋亡指数的影响。方法复苏传代口腔鳞癌高、低淋巴结转移潜能细胞株，利用倒置显微镜观察不同细胞株的形态学差异，采用病理图像分析系统对两种不同细胞株的形态学参数进行分析；利用免疫细胞化学检测两种细胞株中CEA、EMA的表达；流式细胞术检测培养12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h时间节点细胞周期分布差异。结果高淋巴结转移细胞株呈梭形外形，粘附性较差，随传代时间的延长，细胞异型性更加明显、且梭形变较突出；低淋巴结转移细胞株呈圆形或卵圆形，细胞粘附性差，体积较小，细胞异型性不明显；高淋巴结转移细胞株CEA、EMA的阳性细胞比率为(84±7)%和(83±5)%，在低淋巴结转移细胞株中的阳性细胞比率分别为(89±7)%和(81±6)%，两种指标在不同细胞株中的阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞形态学图像分析结果显示2种细胞株在细胞面积、周长、等效直径、长径、短径高转移组明显高于低转移组，差异有统计学意义(P0.05)；S期明显高于低淋巴结转移组，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验材料与设备 口腔鳞癌淋巴结高转移细胞株(SCC-LH)、低转移细胞株(SCC-LL)由北京大学医学部口腔医学院惠赠。RPMI- 1640细胞培养基(lnvin’ogen公司)；新生小牛血清 (杭州四季青生物工程有限公司)；胰蛋白酶A 、青霉素、链霉素(华北制药股份有限公司)；二甲基亚砜(DMSO) (美国Sigma公司)；EMA鼠抗人单克隆抗体、CEA鼠抗人单克隆抗体 (北京中杉试剂公司)；倒置显微镜(日本Olympus)；PI粉(美国Sigma公司);AnnexinV-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 (南京凯基生物)；CO2培养箱 (科俊仪器有限公司)；低温高速离心机D-78532(德国 Hettich Zentrifugen 公司) FAC Sort 流式细胞仪 (美国BD公司)。

    1.2 细胞复苏 实验室常规消毒，紫外照射40 min，培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱37℃预热20 min，从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入40℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化，将细胞悬液移入15 ml离心管，缓慢加入4 ml培养液，离心(1 000 r/min ......