付素兰 刘景武 孙文泽

    ·论著·

    一种快速、简便的模板提取方法用于PCR检测粪便中的金黄色葡萄球菌的研究

    付素兰 刘景武 孙文泽

    目的建立一种快速、简便的模板提取方法用于PCR检测粪便中的金黄色葡萄球菌。方法利用FTA滤膜,无需增菌，直接从人工污染金黄色葡萄球菌的粪便中提取DNA模板，以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)为靶基因，经过PCR扩增得到279 bp的产物。通过凝胶电泳，和凝胶成像技术观察结果。结果使用FTA滤膜可有效的提取DNA模板，消除了样本中的PCR抑制因子，通过PCR方法检测人工污染的粪便中的金黄色葡萄球菌，检出限为102 cfu/ml，可在6 h内完成检测。结论FTA滤膜用于PCR检测粪便中的金黄色葡萄球菌操作简便、快速。使用FTA滤膜法制备模板DNA,为食源性致病菌快速检测构建了一个技术平台。

    PCR；粪便；金黄色葡萄球菌；FTA 滤膜

    目前，对于金黄色葡萄球菌有很多检测方法，在应对突发公共卫生事件时，快速准确的判断病原菌，成为诊疗的关键。传统检测方法是可靠，但费力、耗时，不能满足临床诊断的需要。分子生物学方法具有灵敏度高，快速的特点，但必须制备高纯度的模板，而粪便中主要是一些食物残渣如脂肪、植物纤维、蛋白质等，这些抑制因子的存在大大降低了PCR检测的灵敏度，因而，限制了PCR方法在临床检测中的广泛应用。所以，如何制备高纯度的模板成为关键。FTA滤膜能在室温下对各种生物样品进行收集、运输、存档,还可以用于核酸纯化，进行PCR、 SNP、RT-PCR、 RFLP 分析，其最早是用于储存血液样品，FTA 卡是将变性剂和螯合剂渗透在纤维基质上，当捕捉到细胞后能自动将其裂解，DNA吸附在FTA 卡上经干燥后既可长期保存，也可以用专用缓冲液洗涤，去除样品中的杂质、细胞残片，以及其他PCR抑制因子的干扰 ......