赵志明 郝桂敏 周亮 朱序理 王跃

    ·论著·

    人卵巢黄素化颗粒细胞bcl-2蛋白及mRNA的表达与卵巢反应性的关系

    赵志明 郝桂敏 周亮 朱序理 王跃

    目的探讨体外受精-胚胎移植中人卵巢黄素化颗粒细胞凋亡相关基因bcl-2蛋白和mRNA的表达与相应卵巢反应性的关系。方法收集行体外受精-胚胎移植患者卵泡液中的黄素化颗粒细胞28例，根据卵泡数不同进行卵巢反应性分组分为低反应组、中反应组和高反应组；免疫细胞化学方法检测颗粒细胞bcl-2蛋白表达；RT-PCR测定颗粒细胞bcl-2 mRNA表达。分析人黄素化颗粒细胞bcl-2蛋白及mRNA表达与卵巢反应性的关系。结果分离提纯的人黄素化颗粒细胞于24 h内贴壁生长良好。免疫细胞化学结果显示，随着获卵数的增加bcl-2蛋白HSCORE评分(以下简称HSCbcl-2)逐渐上升，HSCbcl-2与获卵数呈正相关(P1 材料与方法

    1.1 标本来源 人卵巢黄素化颗粒细胞标本，取于2007年11月到2008年2月在河北医科大学第二医院生殖医学科行IVF治疗的不孕症患者28例，月经周期正常，不孕原因为双侧输卵管梗阻或男性不育。年龄23～37岁，平均(31±5)岁，基础体温呈双向型，血清泌乳素水平在正常范围，受试前3个月内均未服用过激素类药物。促排卵方案采用长周期降调节方案，常规促性腺激素(gonadotrophin,Gn)刺激卵泡发育，阴道B超和尿排卵试纸半定量法监测卵泡发育，适时肌注人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)5 000～10 000 U，34～36 h后阴道超声引导下穿刺取卵。取卵日B超监测下经阴道后穹窿穿刺取卵。取卵后第2或第3天行宫腔内胚胎移植术，移植后14 d测定尿妊娠试验阳性，移植后4周B超检查宫腔内可见孕囊，为临床妊娠。记录每位患者使用Gn用量、获卵数等。分离出卵丘复合物后的卵泡液及颗粒细胞经患者夫妇同意用于科研用途。

    1.2 分组原则 根据取卵时卵泡发育数不同进行卵巢反应性分组，卵泡直径为16 mm以上的卵泡数≤4个为卵巢低反应组(低反应组)，卵泡数5～19个为卵巢中反应组(中反应组)，≥20个为卵巢高反应组(高反应组)。

    1.3 人黄素化颗粒细胞的分离和培养 颗粒细胞取自河北医科大学第二医院生殖医学科行IVF女性的卵泡穿刺液，每例分离出卵子后的卵泡液离心后的细胞沉淀物经密度梯度法提取颗粒细胞，经胰蛋白酶消化后，经胎盘蓝染色细胞存活率在85%～90%，将活颗粒细胞浓度调整为2×105/ml的单细胞悬液备用 ......