潘坤 李鹏 张泽明 赵学琴 冯欣

    ·论著·

    Siah2调控脯氨酰羟化酶3表达在非小细胞肺癌中的临床意义

    潘坤 李鹏 张泽明 赵学琴 冯欣

    目的观察Siah2(seven in absentia2)及脯氨酰羟化酶3(prolyl hydroxylase 3，PHD3)在人非小细胞肺癌及癌旁组织中的表达，并探讨上述两者差异表达在非小细胞肺癌发病过程中的临床意义。方法应用RT-PCR检测非小细胞肺癌患者89例肿瘤及癌旁正常肺组织标本Siah2、PHD3 mRNA表达情况，Western blot检测上述指标的蛋白质表达水平，并分析其与肺癌临床特征的关系。结果非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Siah2蛋白及mRNA表达量均明显高于癌旁组织(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取河北大学附属医院2010年7月至2012年4月经手术切除并经病理确诊的非小细胞肺癌患者89例的肺癌组织、癌旁正常肺组织(距离肿瘤边缘>5 cm以上)样本进行试验，89例患者中，男54例，女35例；年龄37～64岁，中位年龄58岁。其中有淋巴结转移组51例，无淋巴结转移组38例，TNM分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期34例，Ⅲ期29例。临床分期标准：按照第7版美国联合癌症分类委员会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)制订的TNM分期标准分类。上述患者术前均未行放疗、化疗、介入及中医中药等抗肿瘤治疗，均有完整的病例资料并全部知情同意。Western blot检测所用的肿瘤肺组织及癌旁正常肺组织切除后立即置于-70℃冰冻保存。

    1.2 实验方法 RT-PCR：按照上海生工TRIZOL试剂说明书提取总RNA，逆转录之后行PCR，扩增引物由上海生工合成，PCR 反应参数：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，适宜温度退火30 s，72℃延伸60 s，反应适当循环后72℃延伸10 min。得到RT-PCR产物后经琼脂糖凝胶电泳，凝胶图像分析系统对扩增产物条带吸光度半定量分析。检测指标引物序列、退火温度、产物长度、循环数等参数见表1。

    表1 RT-PCR实验中PHD3、Siah2及内参照β-actin的详细参数

    Western blot：取0.1 g肺组织标本剪碎后加入RIPΑ 裂解液 ......