申叶春 李立恒 蔡艳霞 张凡

    ·论著·

    不同淋巴结转移潜能口腔鳞癌细胞株snail基因及蛋白表达的研究

    申叶春 李立恒 蔡艳霞 张凡

    目的探讨口腔鳞癌细胞株snail基因及蛋白表达与淋巴结转移关系。方法复苏传代口腔鳞癌高、低淋巴结转移潜能细胞株，流式细胞术和RT-PCR检测培养12、24、36、48、60、72 h时间节点snail基因及蛋白表达差异。结果流式细胞术检测结果显示：高淋巴结转移细胞株snail蛋白的阳性表达率为(48±4)%，低淋巴结转移株为(20±4)%，高转移细胞株明显低于低转移细胞株，差别有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验材料及设备 口腔鳞癌淋巴结高转移细胞株(SCC-LH)、低转移细胞株(SCC-LL)由北京大学医学部口腔医学院惠赠。RPMI-1640细胞培养基(lnvin’ogen公司)；新生小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司)；胰蛋白酶A、青霉素、链霉素(华北制药股份有限公司)；二甲基亚砜(DMSO)(美国Sigma公司)；snail-FITC检测试剂盒(南京凯基生物)；CO2培养箱(科俊仪器有限公司)；低温高速离心机D-78532 (德国 Hettich Zentrifugen 公司) FAC Sort 流式细胞仪(美国BD公司)。

    1.2 细胞复苏 实验室常规消毒，紫外照射40 min，培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱37℃预热20 min，从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入40℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化，将细胞悬液移入15 ml离心管，缓慢加入4 ml培养液，离心(1 000 r/min，5 min)，用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，放培养箱中培养。

    1.3 细胞传代培养 紫外线照射超净工作台30 min，用75%乙醇擦拭双手，预热培养液，两种细胞株均在含10%小牛血清、青霉素(100 U/ml)、链霉素(100 U/ml)双抗的RPMI-1640培养液中培养，温度37℃、相对湿度90%、体积分数为5%CO2的培养箱中进行培养，定期观察细胞生长情况，每隔2～3 d用0.25%胰酶消化，进行传代培养。在倒置显微镜下观察消化细胞，当原贴壁细胞逐渐趋于圆形，细胞质回缩，细胞间不在连接成片时为合适消化程度，加入新的培养液停止消化。用弯头吸管吸取培养液，反复吹打成细胞悬液，吸出适量细胞悬液分装到2～3个培养瓶中，加入适量的培养液后旋紧瓶盖，以乙醇棉球擦拭外壁适当旋松瓶盖，放入二氧化碳培养箱中继续培养 ......