刘秋霞 冯军 赵志国 刘冰慧 龚志平

    白细胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)是由T辅助细胞产生的细胞因子，具有广泛的生物学活性，在免疫应答的调节过程中起着重要作用。本实验的目的就是克隆IL-2基因为下一步IL-2cDNA导入其他细胞为其临床应用打下基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 C57BL/6小鼠、大肠杆菌DH5α、质粒 PEGFP-N1载体、SuperscriptTMIII/RNaseOutTM Enzyme Mix(Invitrogen公司)、Pfu DNA聚合酶(北京天为时代科技有限公司)、T4 DNA 连接酶、BamH I、KpnI、BglII(Takara公司)、RNA提取试剂盒、RT试剂盒、PCR试剂盒(Invitrogen公司)、DNA凝胶回收试剂盒、质粒DNA提取与纯化试剂盒(Promega公司)、标准分子量DNA、PCR Markers(北京天为时代科技有限公司)

    1.2 方法

    1.2.1 总RNA提取:颈脱位处死C57BL/6小鼠，无菌摘除脾脏，使用RNA提取试剂盒提取RNA并进行完整性及纯度测定。

    1.2.2 RT-PCR:按照Genebank提供的序列，由上海生工生物工程有限公司设计合成引物。分别为:β-actin:上游5’>CCCCAAGGCCAACCGTGAA <3’下游5’>CGGAATCGCTCGTTGCCAATGT<3’扩增产物为 435 bp ......