孙正清 苏芳 盖成林 杨天德

    ·论著·

    异丙酚对大鼠脑损伤后神经细胞凋亡及脑组织Caspase-3表达的影响

    孙正清 苏芳 盖成林 杨天德

    目的探讨异丙酚对大鼠脑损伤后神经细胞凋亡及脑组织Caspase 3蛋白表达的影响，为异丙酚的临床应用提供更为重要的科学依据。方法24只雄性Wistar 大鼠随机分为假手术组、冷冻伤后0.9%氯化钠溶液组和异丙酚组。异丙酚给药量为临床麻醉相关剂量(100 mg/kg)：冷冻伤后15 min腹腔注射异丙酚50 mg/kg，0.5 h后再次追加相同剂量。采用颅骨外脑冷冻伤法，运用液氮冷冻器局部冷冻大鼠左侧顶部脑组织60 s制作冷冻伤即脑损伤模型。3组伤后24 h采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,采用免疫组化法测定Caspase 3蛋白表达,并进行神经创伤评分。结果异丙酚组神经细胞凋亡与0.9%氯化钠溶液组比较降低(P1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 清洁级雄性 Wistar 大鼠24只，体重230～250 g，由第三军医大学大坪野战外研所提供。随机分为假手术组：只切开头皮而未行冷冻伤处理；冷冻伤后0.9%氯化钠溶液组：冷冻伤后15 min腹腔注射0.9%氯化钠溶液5 ml/kg,0.5 h后再次追加相同剂量；异丙酚组：冷冻伤后15 min腹腔注射异丙酚50 mg/kg，0.5 h后再次追加相同剂量。每组8只大鼠，3组伤后24 h进行神经创伤评分，之后处死动物，收集脑组织标本运用TUNEL技术进行凋亡检测,采用免疫组化法测定Caspase 3蛋白表达。

    1.2 动物模型制备 按照参照文献[2]的方法制备动物模型。1%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔麻醉大鼠，待角膜及翻正反射消失后，俯卧位固定于立体定位仪上，碘氟消毒头部皮肤，沿正中切开头皮，分离骨膜，暴露左顶颅骨。将内盛丙酮的冷冻器直接浸泡入液氮中预冷，使冷冻器温度为液氮温度(-196℃)。将直径5 mm冷冻头垂直置于矢状缝左旁开5.5 mm为圆心的骨面上(冷冻头前缘至冠状缝)，冷冻60 s，造成左顶叶脑皮层的冷冻伤。手术室温度为25℃，术中电灯泡照射维持肛温为37～37.5℃。术毕自由进食水。

    1.3 TUNEL法脑组织凋亡检测 冷冻伤后24 h,3组大鼠经1%戊巴比妥钠(60 mg/kg)深麻醉，剪开胸前臂，暴露心脏，经左室插入静脉针头直达主动脉，快速灌注肝素生理盐水，剪开右心耳放血，待流出液体清亮后(约需0.9%氯化钠溶液200 ml)，再以4%多聚甲醛溶液灌注45 min，约300 ml固定 ......