李文建 李易明 李勇 王冀 刘钊

    胱硫醚γ-裂解酶在缺氧缺血性脑病新生大鼠肾细胞凋亡中的作用

    李文建 李易明 李勇 王冀 刘钊

    目的探讨胱硫醚γ-裂解酶在缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠肾脏肾细胞凋亡中的作用机制。方法新生7 d Wistar大鼠制备HIE模型。分为假手术对照组和HIE组，于HIE后6 h、12 h、24 h和48 h处死大鼠，取肾脏组织，应用流式细胞术检测肾细胞凋亡情况;MPO检测肾脏组织炎性损伤的程度;应用免疫组织化学法检测肾细胞Bax蛋白的表达情况;应用Western blot技术检测细胞凋亡与p-JNK信号通路的关系。结果HIE组6 h肾脏阳性凋亡细胞开始增多，24 h达到高峰，各时间点阳性凋亡细胞均高于对照组(P<0.05);HIE组6 h Bax阳性细胞表达开始增多，24 h达到高峰，各时间点阳性细胞均高于对照组(P<0.05);HIE组6 h MPO的OD值增高，24 h达到高峰，各时间点OD值均高于对照组(P<0.05);HIE组6 hp-JNK蛋白表达开始增多并24 h达到高峰;对照组CSE蛋白均高于HIE组(P<0.05)，CSE随时间逐渐降低。结论HIE新生大鼠肾脏细胞CSE蛋白表达降低，对肾脏细胞凋亡有抑制作用，其可能通过p-JNK信号通路实现的。

    胱硫醚γ-裂解酶;缺氧缺血性脑病;肾脏细胞;凋亡;p-JNK

    硫化氢(hydrogen sulfide，H2S)被认为是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的第三类气体信号分子[1]。H2S作为一种内源性抗氧化物质，可能通过抗氧化、抑制凋亡的发挥抗脑[2]、心[3]、肝[4]和肾[5]等器官缺氧缺血性损伤作用。缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿常见疾病之一，病死率高，其是围产期窒息导致脑组织缺氧缺血性损伤[6]。HIE除脑组织缺氧缺血性损伤外[7，8]，肾脏为损伤的重要脏器之一。本研究通过在体水平实验，利用流式细胞术检测HIE状态下肾细胞凋亡情况，应用髓过氧化物酶(MPO)活性测定肾脏炎症损伤情况，应用免疫组织化学法检测肾细胞Bax蛋白的表达情况;应用Western blot技术检测肾细胞凋亡信号通路与CSE蛋白表达的关系，为研究HIE新生儿肾细胞凋亡的发生机制提供实验理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 Annexin V-FITC/PI试剂盒(BD公司);大鼠MPO酶联免疫检测试剂盒(上海生工公司);羊抗鼠Bax、CSE和p-JNK单抗(eBioscience公司);蛋白酶抑制剂、去磷酸化酶抑制剂和β-actin抗体(Sigma公司);Western blot试剂和标准Marker(Bio-Rad公司);流式细胞仪(BD公司);酶标仪(美国 Invitrogen公司);蛋白电泳(Bio-Rad公司) ......