潘志兰 杨彦 张永梅 张志敏 冯丽倩 邢英杰

    ·论著·

    急性髓系白血病患者CXXC5基因表达水平及与预后的相关性

    潘志兰 杨彦 张永梅 张志敏 冯丽倩 邢英杰

    目的研究急性髓系白血病(AML)患者中CXXC5基因的表达水平，并分析其与临床病理特征的相关性。方法应用EvaGreen实时定量PCR( RQ-PCR) 方法检测AML 患者中CXXC5基因表达量。结果结果显示与24例对照相比，94 例AML患者CXXC5转录本水平显著降低 (P1 资料与方法

    1.1 一般资料 96例骨髓标本均取自2011年1月至2014年1月期间在河北省石家庄市第一医院血液科住院的初诊AML患者,诊断及分类标准按《血液病诊断及疗效标准》[10]。患者临床病理学特征见表1。对照组骨髓标本24例，其中包括19例缺铁性贫血(IDA)和5例免疫性血小板减少症患者。全部患者均于初诊时抽取骨髓10 ml，肝素抗凝，用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞。人类白血病细胞系(HL-60、NB4、THP-1、SHI-1、U937、HEL和K562)购自中国科学院上海细胞生物所。细胞采用RPMI1640培养基(含10%胎牛血清)于CO2培养箱(37℃、5% CO2)静置培养。当细胞生长状态良好并且融合度达到80%左右时，用2.5 g/L的胰蛋白酶消化进行细胞传代。

    1.2 总RNA提取和cDNA合成 细胞计数后，按106个/ml在1.5 ml eppendorf管中加入适量TRIzol试剂，提取总RNA。分光光度法测定纯度后取2.0 μg，应用随机引物逆转录合成第一链cDNA，总体系40 μl，含MMLV逆转录酶200 U、dNTP(每种0.5 mmol/L)，10 mmol/L DTT，RNAsin 25 μl，37℃逆转录1 h，95℃ 5 min灭活，cDNA保存于-20℃备用。

    1.3 实时定量PCR(RQ-PCR) 应用EvaGreen染料(Biotium，美国)在7300扩增仪(ABI，美国)上完成RQ-PCR。CXXC5引物序列如下：上游引物，5’-GTGGACCCCTCGGCAGTTG-3’；下游引物，5’-CACACGAGCAGTGACATTGC-3’。PCR反应体系包括：dNTP 0.2 mmol/L，MgCl24 mmol/L，引物0.4 μmol/L，1×ROX，1.0 U Taq DNA聚合酶(MBI，美国)，和50 ng cDNA。反应条件：94℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸30 s ......