刘晓坤 罗钢 赵平

    ·论著·

    大鼠外伤性视神经病变后GAP-43表达的变化

    刘晓坤 罗钢 赵平

    目的研究大鼠视神经夹挫伤后视神经和视网膜神经节细胞(retinal gangliocytes，RGCs)形态学及生长相关蛋白-43(growth associated protein-43，GAP-43)表达的变化。方法采用大鼠球后视神经钳夹伤模型，分别于损伤后1、4、7、14、28d处死动物，HE染色观察视神经组织及RGCs的动态改变，免疫组化方法检测视神经轴突GAP-43的表达变化。结果视神经损伤后，RGCs数目明显下降，14d内降低速度较快，14d后下降速度减慢；与正常大鼠视神经轴突相比，GAP-43表达明显增加，伤后14d达峰值，14d后逐渐下降(P1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 选用清洁级健康成年Sprague-Dawley大鼠36只(36眼)，雌性，体重230～250 g，由河北医科大学实验动物中心提供。健康无眼疾，实验期间由河北医科大学第三医院动物实验中心代养。随机分为正常组(6只6眼)，损伤组(30只30眼)。损伤组再按损伤后存活的时间随机分为1、4、7、14d和28d 5组，每组6只。每只动物左眼为实验眼，右眼为假伤眼。

    1.2 视神经损伤动物模型制作 腹腔注射6 g/L戊巴比妥钠(60 mg/kg)麻醉。固定于俯卧位。沿角膜缘剪开鼻侧球结膜，分离并暴露视神经。于球后2 mm处用压力恒定的反向镊夹持视神经，致伤时间分别为20 s，同时观察大鼠眼底血液供应情况，避免损伤眼动脉。注意反向镊尖与视神经的长轴垂直。松开反向镊后，缝合球结膜。致伤眼直接对光反应消失，瞳孔散大固定；检眼镜观察眼底，视网膜血管无出血与梗塞者为成功制作之动物模型，术后结膜囊内涂红霉素眼膏。

    1.3 取材 正常对照组于损伤后4d取材，损伤组分别于损伤后1、4、7、14d和28d 5个时间点取材。6 g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(60 mg/kg)，开胸，经左心室插管，灌注0.9%氯化钠溶液，冲净血液，再灌注4℃ 40 g/L的多聚甲醛磷酸缓冲液250 ml，先快后慢，持续30 min。去除眶外侧和眶上侧骨壁，取大鼠眼球和视神经(直至视交叉处，以判断损伤远近端)。

    1.4 视神经与视网膜光镜切片的制备 40 g/L多聚甲醛固定，依次梯度乙醇脱水、透明、包埋，冠状面4 μm连续切片。常规HE染色。光学显微镜下观察视神经和视网膜的形态学改变。在Motic Med 6.0 数码医学图像分析系统内在相同的放大倍数(200 倍)下 ......