刘印华 李树义 赵志强 张庆波

    黄芪桂枝五物汤载于《金匮要略·血痹虚劳病脉证治》，该方由黄芪、芍药、桂枝、生姜、大枣五味药组成，具益气温经、和营通脉之功[1]。原方主要是治疗血痹，而现代临床应用已远远超越了原方“血痹”症的范畴，尤其是在治疗类风湿性关节炎、微循环障碍和脑中风后遗症等方面，收到满意的疗效[2]。长期以来备受中医学者青睐，是临床常用经典名方之一。黄芪是黄芪桂枝五物汤中的主要成分之一，黄芪多糖具有多种重要的生物学作用，包括对免疫功能的影响，但黄芪多糖对机体免疫功能影响的系统研究，经河北省医学情报研究所查新(编号:13010520130618)目前在国内外尚未见文献报道。本项目将通过小鼠脾细胞体外实验，系统研究黄芪多糖对免疫功能的影响，为临床应用和相关产品的开发提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 黄芪多糖:由河北联合大学药学院提供。测增殖用试剂WST-1:购于江苏碧云天生物科技公司。

    1.2 实验用动物 取4～6周龄昆明种小鼠，体重(20±2)g，雌雄各半，SPF级，购自北京军事医学科学院。(合格证编号:0123883)

    1.3 小鼠脾细胞增殖活性的测定 取5周龄小鼠4只，雌雄各2只，颈椎脱臼处死，无菌分别取脾脏，细胞筛研磨成脾淋巴细胞悬液，加入1 ml蒸馏水破碎红细胞，30 s后加入1.8%氯化钠溶液，PBS洗细胞3次，计数细胞数，调细胞浓度为1.0×106/ml。在96孔细胞培养板中，每孔加100 μl细胞悬液，10 μl不同浓度的黄芪多糖溶液(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/ml)，同时设不加黄芪多糖的对照组。每组设3个复孔，置CO2培养箱中分别培养3、6、9 d，用WST-1测OD值，4只小鼠取均值。

    1.4 小鼠IL-2，IFN-γ的测定 上述细胞测定增殖前，取上清50 μl置于-80℃冰箱中保存备用。样品收集完毕后，分别检测IFN-γ、IL-2的含量(按酶联免疫试剂盒说明书的要求操作) ......